盧徐漣，酈秀芳，張海勇，呂艷婷，胡孟鈞

（諸暨市人民醫(yī)院 病理科，浙江 紹興 311800）

肺腺癌新分類各亞型與EGFR突變的相關(guān)性

盧徐漣，酈秀芳，張海勇，呂艷婷，胡孟鈞

（諸暨市人民醫(yī)院 病理科，浙江 紹興 311800）

目的：探討肺腺癌新分類[2011年國際肺癌研究會（IASLC）/美國胸科協(xié)會（ATS）/歐洲呼吸協(xié)會（ERS）肺癌多學(xué)科協(xié)作組更新的非小細胞肺腺癌的分型標(biāo)準]各亞型與表皮生長因子受體（EGFR）突變之間的關(guān)系。方法：共納入240例手術(shù)切除的非小細胞肺腺癌患者。采用ARMS法對所有手術(shù)標(biāo)本行EGFR突變檢測?？ǚ椒治霰容^不同病理亞型與患者EGFR突變發(fā)生率的關(guān)系。結(jié)果：納入EGFR突變檢測的240例患者中，大部分屬于腺泡狀（占89%）和乳頭狀（占56%）肺腺癌類型。EGFR在腺泡狀、貼壁狀、乳頭狀以及微乳頭為主腺癌亞型的發(fā)生率高于非該亞型的肺腺癌（P＜0.05）；實性為主腺癌亞型EGFR突變發(fā)生率低于非實性為主腺癌亞型（P＜0.05）。結(jié)論：不同的腺癌病理亞型EGFR突變發(fā)生率存在差異，其中腺泡狀為主亞型、微乳頭為主亞型、乳頭狀為主亞型和貼壁狀為主亞型的突變發(fā)生率較高，實性為主腺癌亞型突變發(fā)生率較低。[關(guān)鍵詞] 肺腺癌；癌，非小細胞肺；病理分型；表皮生長因子受體

據(jù)統(tǒng)計，2013年，肺癌人數(shù)在男女患癌癥人群中分別占28%和26%[1]。根據(jù)組織學(xué)特征和應(yīng)對傳 統(tǒng)治療的方法的不同，可以把肺癌分為兩大類：非小細胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）和小細胞肺癌。NSCLC分為3個主要的細胞類型：腺癌、鱗癌和大細胞癌，并進一步分為不同的亞型和變異[2]。在肺癌患者中，大部分是NSCLC（約占85%），其中腺癌是主要的細胞類型。2011年由國際肺癌研究會（IASLC）/美國胸科協(xié)會（ATS）/歐洲呼吸協(xié)會（ERS）肺癌多學(xué)科協(xié)作組聯(lián)合對非小細胞肺腺癌的病理類型進行了更新。該分類將腺癌分為原位腺癌（5年生存率為100%）、微浸潤腺癌（5年生存率為100%）和浸潤腺癌。浸潤腺癌包括貼壁樣、腺泡樣、乳頭樣、微乳頭樣、實性為主型和黏液型、胚胎型、膠樣和腸型變異。浸潤性肺癌的發(fā)生是連續(xù)積累基因突變和表觀遺傳變異的結(jié)果，腫瘤的形態(tài)學(xué)也能反映這一改變[3]。

肺癌目前被認為是一種具有自身特異性的疾病。研究發(fā)現(xiàn)肺腺癌中表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）突變，以及EGFR酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitors，TKIs）能有效延長EGFR突變陽性患者的無進展生存期，這對肺癌的治療具有劃時代的意義[4-7]。美國病理學(xué)協(xié)會（CAP）、IASLC和分子病理學(xué)協(xié)會最近出版了肺癌EGFR突變的分子檢測的建議，指出患有晚期腺癌的所有患者，無論性別、種族、是否有吸煙史或其他臨床危險因素，都應(yīng)該進行EGFR檢測[8]。

盡管近年來已經(jīng)發(fā)表了一些有關(guān)EGFR突變的腺癌亞型的報道，但是新的肺腺癌病理亞型分類與EGFR突變的關(guān)系尚未明確。因此，本研究通過檢測240例肺腺癌患者EGFR的突變情況，探討新的肺腺癌分類中不同病理亞型與EGFR突變之間的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 一般資料 共納入我院2008年6月至2014年10月間240例經(jīng)手術(shù)切除的非小細胞肺腺癌患者手術(shù)標(biāo)本。其中男122例，女118例；年齡3～76歲，中位年齡59歲，65歲以下135例，65歲及以上105例。根據(jù)吸煙史統(tǒng)計，既往或現(xiàn)在吸煙者119例，不吸煙者121例。根據(jù)病理分期，I期89例（占37.1%），I I期46例（占19.2%），I I I期105例（占43.7%）。根據(jù)病理亞型區(qū)分，微浸潤腺癌4例，貼壁狀腺癌29例，腺泡狀為主腺癌89例，乳頭狀為主腺癌56例，微乳頭為主腺癌35例，實性為主亞型腺癌24例，浸潤性腺癌變異亞型3例。

1.2 方法

1.2.1 核酸提?。哼x取含有腫瘤病變細胞的石蠟包埋病理組織，且腫瘤細胞盡量在蠟塊中部。將石蠟包埋組織切成厚為5 μm的切片，根據(jù)腫瘤病變細胞數(shù)量多少，取3～8片石蠟切片，按照石蠟切片樣品核酸提取試劑盒（廈門艾德生物醫(yī)藥科技股份有限公司）說明書提取核酸。將核酸樣本作好標(biāo)記用于后續(xù)PCR擴增或放置于-20 ℃以下保存。

1.2.2 分子分析：本方法利用人類EGFR基因突變檢測試劑盒（廈門艾德生物醫(yī)藥科技股份有限公司）， 基于實時熒光定量PCR平臺結(jié)合了特異引物和雙環(huán)探針兩種技術(shù)，檢測石蠟包埋病理切片組織中提取的DNA樣品中含有的突變基因。利用特異引物對突變靶序列進行高精準PCR擴增放大，與此同時，利用雙環(huán)探針對擴增產(chǎn)物進行檢測，結(jié)合特別的PCR反應(yīng)程序和高特異Taq酶的使用，在實時熒光定量PCR平臺上實現(xiàn)對樣品DNA中突變序列的檢測，以達到對稀有突變檢測的高特異性和高靈敏度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理方法 使用SPSS13.0軟件分析獲得統(tǒng)計結(jié)果。采用x2分析比較分類變量。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床病理特征 患者的臨床病理特征見表1。

表1 240例患者的臨床病理特征

2.2 不同病理亞型與EGFR突變發(fā)生率的關(guān)系 x2分 析顯示貼壁狀為主亞型腺癌的EGFR發(fā)生率高于非貼壁狀為主亞型腺癌（68.8% vs 36.9%，P=0.001）；微乳頭為主亞型腺癌發(fā)生率高于非微乳頭為主亞型腺癌（71.4% vs 35.6%，P=0.0001），實性為主亞型腺癌EGFR突變發(fā)生率低于非實性為主亞型腺癌（12.5% vs 43.9%，P=0.0029），見表2。

3 討論

TKIs的出現(xiàn)給NSCLC患者的治療帶來了革命性的變化，尤其是肺腺癌患者[5]。眾所周知，EGFR突變與TKIs的療效密切相關(guān)。2011年由IASLC/ATS/ ERS肺癌多學(xué)科協(xié)作組聯(lián)合對非小細胞肺腺癌病理類型的更新在肺癌鄰域具有革命性的里程碑意義。協(xié)作組通過多學(xué)科方法緊密結(jié)合形態(tài)學(xué)、臨床和影像學(xué)數(shù)據(jù)、免疫組織化學(xué)和分子分析。這一新的分類標(biāo)志著肺癌治療跨入了真正的個性化醫(yī)學(xué)時代。關(guān)于新的分類國內(nèi)外已有部分報道。Shim等[9]通過對107例肺腺癌標(biāo)本的研究指出，EGFR突變與貼壁狀和微乳頭狀腺癌密切相關(guān)。Sun等[10]表示EGFR突變除與貼壁狀腺癌有關(guān)外，還與乳頭狀、實性為主型和黏腺癌有關(guān)，而與微乳頭狀腺癌無關(guān)。另外，Zhang等[11]通過349例女性不吸煙肺腺癌患者的研究表明，腺泡狀腺癌的EGFR突變率很高。其他的研究[12-14]結(jié)果也不完全一致。

表2 不同病理亞型與EGFR突變發(fā)生率的關(guān)系（例）

研究[15-16]表明，EGFR突變主要在微乳頭狀腺癌中比較常見，其次是乳頭狀、腺泡狀和貼壁狀為主的腺癌。EGFR突變少見于實性為主型腺癌。本研究中，腺泡狀（占26.53%）、微乳頭狀（占25.51%）、乳頭狀（占22.45%）以及貼壁狀（占20.41%）這幾種肺腺癌類型的EGFR突變率明顯高于實性為主型（占3.06%），與之前的報道并不完全一致。

雖然近年來已經(jīng)報道了一些EGFR突變的肺腺癌相關(guān)的組織學(xué)類型[17-18]，但是EGFR突變和腺癌亞型的關(guān)系尚不清楚。研究[9-10]表明，EGFR突變率在白人肺腺癌患者中為5%～20%，在亞洲肺腺癌患者中為20%～60%。EGFR突變常見于非吸煙女性患者的浸潤性腺癌，病理亞型主要為貼壁狀，其次是腺泡狀和乳頭狀腺癌變異型。本研究收集的患者中貼壁狀腺癌（占68.8%）的EGFR突變率高于非貼壁狀為主亞型腺癌（占36.9%），與之前的研究結(jié)果一致。

在本研究中，微浸潤腺癌占所有患者的比率不到2%，貼壁狀腺癌樣本共29例，占12.08%，浸潤性腺癌樣本共207例，占86.25%。這些浸潤性的腺癌樣本是一類大的腫瘤類型，提出了一種新的分類。因為它們由一個復(fù)雜多樣的組織形式組成。通過使用全面的組織學(xué)分類方法，我們可以根據(jù)主要的亞型分類并確定影響預(yù)后的重要的組織類型。越來越多的數(shù)據(jù)證明實性為主亞型腺癌、微乳頭腺癌、黏液性腺癌的預(yù)后均較差[19-21]。微乳頭為主腺癌的不良預(yù)后不僅證實了多個先前研究的觀察結(jié)果，同時也是對這個新的亞型分類的支持[16，22-25]。

總之，在肺腺癌分化明確的亞型，如貼壁狀、乳頭狀和腺泡狀，它們的EGFR突變率更高，而實性為主型、變異型等亞型卻較低。然而，不管哪種肺腺癌的組織學(xué)亞型，都不能完全預(yù)測EGFR的突變狀態(tài)，因此，任何情況下肺腺癌的EGFR突變檢測都是有必要的。

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（本文編輯：丁敏嬌）

The corrleation between the new lung adenocarcinoma classification and the EGFR mutation

LU Xulian, LI Xiufang, ZHANG Haiyong, LYU Yanting, HU Mengjun. Department of Pathology, Zhuji People’s Hospital, Shaoxing, 311800

Objective: To evaluate the correlation of EGFR mutation and histological subtypes of lung adenocarcinoma based on the IASLC/ATS/ERS classification 2011. Methods: 240 resected lung adenocarcinoma specimens were analyzed by ARMS, then the differences between histological subtypes and EGFR mutation were compared by the x2test. Results: EGFR mutation was detected in 240 specmens, most of which were acinar and papillary predominant adenocarcinoma, 89% and 56% respectively. EGFR mutation rate of the specimens with acinar, lepidic, papillary, or micropapillary component was higher than that of without these components (P＜0.05), and with solid or mucinous component was lower than that without the component (P＜0.05). Conclusion: There is heterogeneity of EGFR mutation in lung adenocarcinoma. The presence of well-differentiated components in lung adenocarcinoma, such as acinar, micropapillary, papillary and lepidic, indicates a higher EGFR mutation rate, while the solid and mucinous component indicates a lower EGFR mutation rate.

lung adenocarcinoma； carcinoma, non-small-cell lung； pathological type； epidermal growth factor receptor

R734.2

B

10.3969/j.issn.2095-9400.2016.10.016

2015-09-10

盧徐漣（1987-），女，浙江諸暨人，技師，碩士。