章文偉，鄧才富，李品明，譚秋生，羅 敏，羅 舜，李 娟

(重慶市藥物種植研究所，重慶 408435)

太白貝母FritillariataipaiensisiP.Y.Li為百合科貝母屬多年生草本植物，以干燥鱗莖入藥[1]，太白貝母生長(zhǎng)于1 600～2 800 m的半陰山地，相對(duì)其他川貝母基源植物品種更具發(fā)展?jié)摿?。太白貝母在民間作為川貝母使用歷史悠久，具潤(rùn)肺止咳、化痰平喘等功效，臨床廣泛用于肺熱燥咳、肺陰虛等病證。由于經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，又適宜山區(qū)發(fā)展，因此太白貝母在促進(jìn)山區(qū)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整、助推農(nóng)民脫貧增收方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

太白貝母自2010年起被列入《中國(guó)藥典》川貝母的基源植物以來(lái)，野生資源人為采挖嚴(yán)重，四川、重慶、云南、青海、陜西等各地均大力發(fā)展太白貝母人工種植，種源目前已成為制約太白貝母產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個(gè)重要因素。本研究分析太白貝母的種子特性，以期為太白貝母的繁育提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試太白貝母種子于2019年6月采集于重慶城口縣明中鄉(xiāng)四合村，海拔1 513 m(N 31°41′09″、E 108°57′08″)。種果采集回后，攤晾，待蒴果開(kāi)裂后取出種子，并簸去癟粒及除去碎葉片等雜物，備用。

1.2 方法

1.2.1 種子外部性狀觀察 千粒重測(cè)定：采用百粒重法，即從純凈種子中不加選擇的取出100粒種子為1組，重復(fù)取8組稱量。根據(jù)8個(gè)重量的稱量讀數(shù)求8個(gè)組平均重量，然后計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差(S)及變異系數(shù)(C)，公式為：

式中：X——各重復(fù)組的重量(g)

N——重復(fù)次數(shù)

∑——總和

通過(guò)測(cè)算，如種粒大小懸殊的種子，變異系數(shù)不超過(guò)6.0，一般種子的變異系數(shù)不超過(guò)4.0，則可按測(cè)定結(jié)果計(jì)算千粒重。如變異系數(shù)超過(guò)這些限度，應(yīng)再數(shù)取8個(gè)重復(fù)，稱重，并計(jì)算16個(gè)重復(fù)的標(biāo)準(zhǔn)差。凡與平均數(shù)相差超過(guò)兩倍標(biāo)準(zhǔn)差的各重復(fù)，均略去不計(jì)。將8個(gè)或8個(gè)以上100粒種子平均重量乘以10，即為種子千粒重。精度與稱量相同。

大小測(cè)定及形態(tài)觀察：隨機(jī)選取成熟的太白貝母種子50粒，在T視鏡下觀察種子形態(tài)，測(cè)定種子長(zhǎng)度和寬度，求平均值。并觀察、記錄種子形態(tài)、色澤。

1.2.2 不同溫度層積處理對(duì)種子形態(tài)后熟胚發(fā)育的影響 層積處理：試驗(yàn)于8月27日開(kāi)展。選擇飽滿、光澤度好的太白貝母種子，5%CuSO4浸泡消毒30 min，用蒸餾水將種子洗凈后于室溫下浸種24 h。河沙沖洗干凈并除去雜質(zhì)，置于100 ℃烘箱高溫滅菌3 h，取出晾至室溫，加入適量滅菌蒸餾水?dāng)嚢柚梁由晨晌粘蓤F(tuán)但不滴水，經(jīng)處理后的種子與經(jīng)高溫消毒后的河沙按1∶3體積比混勻后置于5 ℃、10 ℃、15 ℃條件下層積保存(8月28日)，河沙濕度保持在50%～60%。層積期間以10 d為間隔進(jìn)行取樣。

不同溫度對(duì)太白貝母種胚后熟發(fā)育的影響。通過(guò)測(cè)定胚率，找出最佳形態(tài)后熟溫度條件。分別將取樣的太白貝母種子置于T視顯微鏡下觀察胚芽、胚乳的發(fā)育情況，拍照并測(cè)量其長(zhǎng)度，胚率(%)=種胚長(zhǎng)/胚乳長(zhǎng)×100%，了解不同溫度、不同后熟時(shí)期胚的生長(zhǎng)情況，確定最佳種胚后熟處理溫度。

最佳層積溫度下太白貝母種胚后熟的發(fā)育情況。隨機(jī)選取最佳層積溫度下處理的太白貝母種子30粒，F(xiàn)AA固定液固定，備石蠟切片用。

2 結(jié)果

2.1 種子外部性狀觀察

太白貝母種子扁平狀，三角倒卵形，外種皮深橘黃色至淡橘黃色，表面有褶皺紋路，薄而透明(圖1)。種子千粒重為(1.447 0±0.055 9)g，種子長(zhǎng)為(6.809±0.578)mm，寬為(5.094±0.419)mm。

圖1 自然干燥狀態(tài)下的太白貝母種子外觀

2.2 不同溫度層積處理對(duì)種子形態(tài)后熟胚發(fā)育的影響

2.2.1 不同處理對(duì)種胚發(fā)育的影響 未經(jīng)層積處理的成熟種子，胚發(fā)育處于心形胚時(shí)期，胚位于種子一角隅(珠孔端)，體積很小，長(zhǎng)度僅占胚乳長(zhǎng)度的12%左右(圖2)，甚至部分種子未見(jiàn)種胚。

經(jīng)層積處理的種子，種胚存在不同程度發(fā)育。

經(jīng)初步觀察，5 ℃層積處理的太白貝母種胚發(fā)育極為緩慢，層積100 d胚率最高僅21.65%，平均僅16.37%；10 ℃和15 ℃層積處理胚的發(fā)育較快，其中10 ℃層積100 d胚率最高可達(dá)79.60%，平均胚率41.12%；15 ℃層積100 d胚率最高達(dá)86.86%，平均胚率55.33%。

2.2.2 太白貝母種子切片觀察 為掌握太白貝母種胚發(fā)育過(guò)程中的變化特征，將上述不同處理不同時(shí)期經(jīng)FAA固定液固定樣本送北京中科萬(wàn)邦生物科技有限公司切片掃描(番紅固綠染色)，結(jié)果(以層積60 d樣本為例，對(duì)照(CK)為未經(jīng)層積處理的樣本)如下：

由圖5可以看出，未經(jīng)層積處理的胚處在心形胚時(shí)期，5 ℃、10 ℃、15 ℃分別處理60 d后，種胚發(fā)生了變化，由層積前的心形胚進(jìn)入魚雷形胚時(shí)期，生長(zhǎng)發(fā)育速率與T視顯微鏡下觀察一致。但切片主要以觀察種胚生長(zhǎng)發(fā)育特征為主，而經(jīng)染色后的種胚部位出現(xiàn)空白，未見(jiàn)任何組織特征。分析其中原因，可能與太貝種子結(jié)構(gòu)以及前期固定處理有關(guān)：太貝種子外種皮海綿質(zhì)邊緣有寬約1 mm的膜翅，胚乳豐富，呈角質(zhì)。固定過(guò)程中，未考慮種皮和角質(zhì)胚乳對(duì)固定液滲透作用的影響，未作去種皮或剝離胚乳僅固定種胚部位等處理，固定液未完全滲透，造成種胚部位固定不充分，且因固定處理保存時(shí)未將固定器皿作抽取真空保存處理，雖低溫保存一定程度上保持了FAA固定液對(duì)組織的固定作用，但因存在空氣交換，又因保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致種胚部位組織降解，故而切片未能觀察到種胚部位發(fā)育特征。

圖6 不同溫度處理太白貝母種胚生長(zhǎng)情況(胚率%)

3 討論

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察到，低溫濕沙層積對(duì)太白貝母完成形態(tài)后熟作用明顯，但溫度過(guò)低不利于種胚發(fā)育。受實(shí)驗(yàn)條件限制，僅設(shè)置了5 ℃、10 ℃、15 ℃三個(gè)不同溫度梯度處理。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，10 ℃、15 ℃處理對(duì)胚發(fā)育有較明顯的促進(jìn)作用，而5 ℃處理下，種胚基本處理原始心形胚狀態(tài)，未見(jiàn)明顯變化。

從表1和圖6看出，層積過(guò)程中單個(gè)處理取樣的10粒種子胚率標(biāo)準(zhǔn)差最大高達(dá)28.33，說(shuō)明同一處理水平內(nèi)部種胚發(fā)育差異較大，可能與種子自然成熟度和飽滿度有關(guān)，也可能與處理過(guò)程中未定期檢測(cè)處理水分含量以及未作定期翻動(dòng)處理以保證全部種子維持正常生理呼吸有關(guān)。由此造成取樣種子間差異大，圖6顯示胚率未維持持續(xù)上升發(fā)展趨勢(shì)。

表1 不同溫度處理太白貝母種胚生長(zhǎng)情況 (%)