結(jié)核分枝桿菌持留生存機(jī)制的研究進(jìn)展

何子純 李升錦

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院呼吸科 重慶 400010)

結(jié)核分枝桿菌持留生存機(jī)制的研究進(jìn)展

何子純 李升錦

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院呼吸科 重慶 400010)

全球約有1/3人口被結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染,但只有10%的感染者可發(fā)生結(jié)核病,而絕大多數(shù)是以潛伏感染形式存在。MTB的潛伏感染決定于MTB能在宿主體內(nèi)以持留狀態(tài)存在的能力。處于持留狀態(tài)的MTB能抵抗巨噬細(xì)胞的吞噬殺滅作用,并能耐受通常對(duì)生長(zhǎng)繁殖期的MTB具有殺滅作用的抗結(jié)核藥的殺滅作用[1]。因此,研究MTB進(jìn)入代謝或休眠持留期和在持留狀態(tài)下存活的機(jī)制,進(jìn)而尋找抑制其進(jìn)入持留期和殺滅結(jié)核持留菌的方法,對(duì)于控制和根除結(jié)核病具有重要的臨床意義。

1 結(jié)核持留菌的研究背景

MTB是一種兼性細(xì)胞內(nèi)寄生菌,并借胞內(nèi)環(huán)境避免暴露于任何細(xì)胞外免疫系統(tǒng)。人們常以M TB在宿主體內(nèi)以非增殖狀態(tài)存在從而造成延緩性病程和導(dǎo)致復(fù)發(fā)的潛伏形式稱為持留現(xiàn)象和持留性,引起這種現(xiàn)象的菌群稱為持留菌。結(jié)核持留菌的存在很早就得到體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的證實(shí),20世紀(jì) 50年代McCune等[2]在 Cornell模型中用大劑量有毒株MTB感染小鼠,并讓疾病進(jìn)展2周,再用抗結(jié)核藥物治療,后取小鼠的肺和脾臟培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)無(wú)MTB生長(zhǎng),停止治療間隔一段時(shí)間后MTB又會(huì)重新在這些組織出現(xiàn),因此McCune認(rèn)為這些組織中可能存在休眠持留狀態(tài)的M TB[2]。1995年,de Wit等[3]用PCR法在一小鼠休眠結(jié)核病模型中證實(shí),經(jīng)異煙肼和利福平長(zhǎng)期化療后培養(yǎng)無(wú)菌的組織內(nèi)有MTBDNA的存在,化療停止后臟器培養(yǎng)可復(fù)陽(yáng)。Wayne等[4]用逐漸降低培養(yǎng)液中氧濃度的方法將MTB誘導(dǎo)進(jìn)入休眠持留狀態(tài),發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)繁殖期MTB和休眠持留期MTB的異檸檬酸水解酶(isocitrate lyase,ICL)、觸酶以及超氧化物歧化酶等的濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而目前仍不清楚是否細(xì)菌的發(fā)育狀態(tài)的改變使得他們不能被免疫系統(tǒng)識(shí)別,亦或是可能由于細(xì)菌表面模式的改變使其免疫原性改變而無(wú)法被免疫系統(tǒng)識(shí)別。隨著分子生物學(xué)研究的快速發(fā)展,對(duì)結(jié)核持留菌的認(rèn)識(shí)也在不斷深入。

2 MTB持留生存機(jī)制

MTB持留生存機(jī)制是指MTB依靠自身和宿主的特性以及它們之間的相互作用在宿主體內(nèi)長(zhǎng)期存在的方式。該機(jī)制會(huì)導(dǎo)致結(jié)核菌潛伏感染、內(nèi)燃復(fù)發(fā)、長(zhǎng)期治療、結(jié)核菌耐藥性等一系列問(wèn)題,因此深入研究MTB持留生存機(jī)制,查找MTB在宿主體內(nèi)以非增殖狀態(tài)存在的本質(zhì)原因,對(duì)于研制抗結(jié)核持留菌藥物有重要的支撐作用。

2.1 MTB代謝改變 M TB從生長(zhǎng)繁殖期進(jìn)入休眠持留期伴隨了某些酶、蛋白質(zhì)等生物學(xué)特性的改變,以適應(yīng)胞內(nèi)低氧缺乏營(yíng)養(yǎng)的環(huán)境。首先,MTB改變?cè)械挠醒醮x途徑,轉(zhuǎn)向依靠乙醛酸循環(huán)支路獲取能量和碳源同時(shí)降低代謝率,維持其在胞內(nèi)長(zhǎng)期生存的需要。ICL是乙醛酸代謝途徑的一個(gè)關(guān)鍵酶,對(duì)M TB的持留性起著決定性的作用。McK-inney等[5]用敲除了icl基因的MTB感染小鼠的實(shí)驗(yàn)證明,敲除株感染小鼠后很快被免疫系統(tǒng)清除,野生株菌負(fù)荷指數(shù)卻一直保持不變,顯示出持留性。其次,Cuuningham等[6]用轉(zhuǎn)換電子顯微鏡和SDSPAGE方法發(fā)現(xiàn)無(wú)氧條件下MTB細(xì)胞壁有增厚,且與16 kD的小熱休克蛋白高表達(dá)有關(guān),M TB的細(xì)胞壁增厚有助于抵抗藥物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),這也可能是藥物對(duì)MTB殺傷作用較弱的主要原因。細(xì)菌代謝表型的特異性是藥物篩選的重要性狀之一,深入了解控制代謝表達(dá)的基因,對(duì)尋找治療結(jié)核持留菌感染的藥物靶點(diǎn)有重要的指導(dǎo)作用。

2.2 影響吞噬溶酶體的形成 吞噬體與溶酶體融合形成吞噬溶酶體,是巨噬細(xì)胞抗原提呈和清除入侵病原微生物的重要途徑。最近研究報(bào)道[7-8]吞噬體的成熟是一個(gè)內(nèi)質(zhì)體與膜蛋白循環(huán)過(guò)程,M TB吞噬體卻可以特異地清除某些重要膜蛋白,使吞噬體不能有效成熟而不能與溶酶體融合。酸性微環(huán)境有利于溶酶體酶活性的發(fā)揮,但MTB不僅產(chǎn)生NH+4中和吞噬體的酸化,還能抑制質(zhì)子-ATP酶降低吞噬體的酸化,并使含菌吞噬體與非溶酶體的內(nèi)質(zhì)體結(jié)合而阻礙吞噬溶酶體的形成[9]。Walburger等[10]還研究到敲除MTB的絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶G(pknG)基因或利用特異性抑制劑阻斷激酶活性,可有效地促進(jìn)巨噬細(xì)胞內(nèi)含MTB的吞噬體與溶酶體發(fā)生融合,感染的MTB也很快被巨噬細(xì)胞殺滅。此外,有毒 MTB細(xì)胞壁含量最多的脂質(zhì)物TDM(T rehalose 6,6-dimycolate)可通過(guò)減少吞噬體的酸化和阻礙吞噬溶酶體融合[11],吞噬溶酶體形成受阻,溶酶體中的酶就不能進(jìn)入含菌吞噬體中作用,MTB就得以存活下來(lái)。

2.3 影響巨噬細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的活化 巨噬細(xì)胞受到刺激時(shí)能產(chǎn)生使其活化的信號(hào),獲得殺菌活性。γ-干擾素(IFN-γ)是巨噬細(xì)胞活化的主要介質(zhì),MTB感染的巨噬細(xì)胞卻對(duì)IFN-γ刺激敏感性大大降低[12]。研究表明[13-14],MTB感染誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞上調(diào)表達(dá)細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制因子(SCOS)和IL-6參與了這一過(guò)程。SCOS通過(guò)JAK/STAT信號(hào)傳導(dǎo)途徑抑制IFN-γ的功能,并抑制IFN-γ激活的下游基因表達(dá);IL-6則通過(guò)某種不依賴信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子l(STAT-1)的途徑抑制IFN-γ激活的下游基因表達(dá),并降低未感染的巨噬細(xì)胞對(duì)IFN-γ刺激的敏感性。MTB的細(xì)胞壁大量表達(dá)一種含特殊多糖結(jié)構(gòu)的糖基磷酯酰肌醇(GPI)-阿拉伯甘露糖(LAM),LAM能插入巨噬細(xì)胞細(xì)胞膜上富含GPI的區(qū)域。插入的LAM一方面可改變巨噬細(xì)胞的膜表面標(biāo)記,抑制巨噬細(xì)胞向CD4+T細(xì)胞呈遞抗原的能力,降低CD4+T細(xì)胞分泌IFN-γ;另一方面可改變巨噬細(xì)胞膜上IFN-γ受體結(jié)構(gòu),使巨噬細(xì)胞對(duì)IFN-γ刺激的敏感性降低[15]。同時(shí)M TB細(xì)胞壁上的一種19X103脂蛋白能以Toll樣受體依賴的機(jī)制抑制IFN-γ誘導(dǎo)的下游基因表達(dá),抑制巨噬細(xì)胞的活化[16]。

2.4 逃避ROI和RNI的殺傷作用 巨噬細(xì)胞活化后產(chǎn)生反應(yīng)氧中間產(chǎn)物(ROI)和反應(yīng)氮中間產(chǎn)物(RNI)消滅吞入的病原菌。研究發(fā)現(xiàn)不能產(chǎn)生ROI的D9變異型巨噬細(xì)胞與能正常產(chǎn)生ROI的未變異巨噬細(xì)胞對(duì)MTB殺傷活性表現(xiàn)一致。應(yīng)用氧自由基清除劑(如超氧化物歧化酶、觸酶等)處理巨噬細(xì)胞,其殺結(jié)核菌能力也沒(méi)有明顯的變化,由此可知MTB對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的ROI有高度的耐受性。耐受機(jī)制可能是：MTB胞壁上的相關(guān)糖脂及菌體分泌的糖脂均有高效的氧自由基清除作用,可抑制巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)的殺傷;MTB產(chǎn)生的蛋白過(guò)氧化氫酶-過(guò)氧化物酶(KatG)具有錳離子依賴的過(guò)氧化物酶活性、細(xì)胞色素P450樣的加氧酶活性及過(guò)氧亞硝酸酶活性,在MTB抵抗ROI及RNI殺傷中起重要作用;MTB降低巨噬細(xì)胞的細(xì)胞色素C氧化酶的表達(dá),抑制了呼吸爆發(fā),因?yàn)榇嗣甘请娮觽鬟f鏈終末環(huán)節(jié)的酶,從而逃避了殺傷[17]。

2.5 降低巨噬細(xì)胞的凋亡率 Balcewicz-Sablinska等分別用減毒株H37Ra和有毒株H37Rv感染巨噬細(xì)胞,并檢測(cè)2者誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的差異,發(fā)現(xiàn)前者明顯高于后者。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)H37Rv感染組可溶性TNF-α受體-2(sTNFR-2)的水平明顯升高,且在H37Ra感染組培養(yǎng)液中外源加入sTNFR-2可使該組巨噬細(xì)胞的凋亡水平降至H37Rv感染組相一致的水平。因此可知MTB通過(guò)誘導(dǎo)sTNFR-2的表達(dá)上調(diào)來(lái)抑制巨噬細(xì)胞的凋亡作用[18]。同時(shí)H37Rv還能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡抑制因子Mcl-l的表達(dá)上調(diào),和/或降低了巨噬細(xì)胞表面Fas的表達(dá)水平,減少巨噬細(xì)胞的凋亡[19-20]。另外,M TB胞壁的LAM也可通過(guò) cAMP抑制劑等抑制細(xì)胞發(fā)生凋亡[21]。巨噬細(xì)胞凋亡率的下降保存了持留菌賴以生存的環(huán)境,是MTB持留生存過(guò)程中的重要步驟。將提高巨噬細(xì)胞的凋亡率作為殺滅持留菌的一個(gè)治療靶標(biāo)具有一定的研究意義。

2.6 MTB持留的基因控制機(jī)制研究 MTB基因者組全序列的闡明及分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展為闡明MTB持留現(xiàn)象的分子機(jī)制提供了有效的手段,研究發(fā)現(xiàn)MTB進(jìn)入巨噬細(xì)胞后存在特殊的基因表達(dá)以適應(yīng)胞內(nèi)環(huán)境。至今主要有sigF,Msr,PcaA,PE家族等基因的研究。近期還發(fā)現(xiàn) relA基因可調(diào)控細(xì)菌的緩慢生長(zhǎng),誘導(dǎo)MTB進(jìn)入休眠持留狀態(tài),Dahl等[22]用實(shí)驗(yàn)作了進(jìn)一步證明,并了解到relA基因主要調(diào)節(jié)了另2個(gè)與持留相關(guān)的hspX基因和eis基因的表達(dá)。hspX基因是能夠調(diào)節(jié)MTB進(jìn)入休眠持留狀態(tài)的DosR蛋白的一個(gè)調(diào)節(jié)因子[23]。eis基因由于具有提高M(jìn)TB在巨噬細(xì)胞中生存能力的作用而且特異性表達(dá)于致病的MTB復(fù)合群引起了人們特別關(guān)注[24]。當(dāng)外周血淋巴細(xì)胞受到Eis抗原的刺激時(shí),以Th2型細(xì)胞分泌IL-10的細(xì)胞免疫為主,活動(dòng)性肺結(jié)核患者對(duì)Eis抗原的細(xì)胞免疫水平低下,經(jīng)抗結(jié)核治療康復(fù)后細(xì)胞免疫維持在較高水平[25],而Th2型免疫反應(yīng)則與感染的進(jìn)展、持續(xù)和慢性化有關(guān)[26]。基因芯片技術(shù)為研究生長(zhǎng)繁殖期和靜止持留階段MTB的基因表達(dá)差異提供了方便,但是確定哪些或者哪一個(gè)特定基因從本質(zhì)上調(diào)控了MTB持留性,有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

3 針對(duì)結(jié)核持留菌的治療現(xiàn)況

現(xiàn)有的抗結(jié)核藥物對(duì)持留性MTB的殺傷作用非常弱,這也是抗結(jié)核化療時(shí)間較長(zhǎng)的主要原因,過(guò)長(zhǎng)的療程也極易導(dǎo)致耐藥菌的產(chǎn)生。研發(fā)抗結(jié)核持留菌藥物能明顯縮短治療周期,防止結(jié)核病內(nèi)燃復(fù)發(fā),降低耐藥菌產(chǎn)生機(jī)率,具有重要的臨床意義。針對(duì)抗結(jié)核持留菌藥物研究大致可從3方面入手：(1)消滅MTB在藥物敏感的增值狀態(tài)阻止其進(jìn)入持留進(jìn)程;(2)將MTB持留菌殺死在持留狀態(tài);(3)使其復(fù)活進(jìn)入藥物敏感狀態(tài)然后消滅它。

甲硝唑是研究較早的1個(gè)抗結(jié)核持留菌的藥物,Wayne等[27]利用逐漸降低培養(yǎng)環(huán)境中氧濃度的方法誘導(dǎo)的結(jié)核持留菌模型來(lái)檢測(cè)一定劑量的異煙肼、利福平、甲硝唑的抗結(jié)核效應(yīng),發(fā)現(xiàn)甲硝唑降低集落刺激單位(CFU)作用最明顯。但是甲硝唑?qū)TB的殺滅作用有一定的限制,故在臨床上應(yīng)用較少[28]。另一藥物硝基咪唑并吡喃類(NAPs)化合物PA-824對(duì)低氧環(huán)境下培養(yǎng)的非復(fù)制期結(jié)核分枝桿菌模型有長(zhǎng)期的殺菌作用,其活性類似于甲硝唑[29],現(xiàn)已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。

異檸檬酸裂合酶(ICL)是MTB胞內(nèi)厭氧代謝的關(guān)鍵酶,將ICL作為抗結(jié)核持留感染的藥物作用靶點(diǎn),達(dá)到消滅宿主體內(nèi)結(jié)核持留菌的目的,是最近國(guó)內(nèi)外研究的一個(gè)熱點(diǎn)。體外具有活性的ICL抑制劑溴3-丙酮酸和3-硝基丙酸鹽正在篩選試驗(yàn)研究中[30],針對(duì)該靶點(diǎn)的新的藥物也在積極的研發(fā)。同時(shí)國(guó)內(nèi)學(xué)者還深入開(kāi)展中藥的抗結(jié)核研究,詹莉等[31]報(bào)道了中藥貓爪草(小毛莨內(nèi)酯)可能通過(guò)促進(jìn)宿主細(xì)胞顆粒裂肽mRNA的表達(dá),增強(qiáng)機(jī)體CTL殺菌能力,達(dá)到抗結(jié)核持留菌的作用。盡管中藥成分多,作用機(jī)制復(fù)雜,但隨著現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展,研發(fā)抗結(jié)核持留性的中藥復(fù)方制劑將有一定的前景。

4 結(jié)語(yǔ)

通過(guò)上面的闡述我們可以看出,目前雖然關(guān)于結(jié)核持留方面的研究很多,而這些研究結(jié)果也確實(shí)顯示與MTB持留生存相關(guān),但是至今我們還沒(méi)有得到最清晰的MTB持留生存的機(jī)制,這也是為什么現(xiàn)在還未找到治療結(jié)核菌持留感染的方法的關(guān)鍵所在。MTB能夠在宿主體內(nèi)持留生存或許是由多方面的因素決定的,但是也有可能存在某一關(guān)鍵因素,找到這一關(guān)鍵因素對(duì)控制和根除結(jié)核病將是一個(gè)重大的突破,隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,基因水平的研究將是解決這一難題的一個(gè)重要突破口。

[1]Tyagi JS,Das T K,Kinger AK.An M.T uberculosis DNA fragment contains genes encoding cell division proteins ftsX and ftsE,a basic protein and homologues of PemK and small protein[J].B Gene,1996,177(1-2)：59-67.

[2]Mccune RM Jr,M cDermott W,T ompsett R,The fate of Mycohacterium tuberculosis in mouse tissues as determined by the microbid enumeration techniqueⅡ.the conversion of tuberculosis infeetion to the latent state by the administration of py razinamide and a companion drug[J].J Exp med,1956,104(5)：763-802.

[3]de Wit D,Wootton M,Dhillon J,Mitchison DA.The bacterial DNA content of mouse organs in the Cronell model of dormant tuberculosis[J].Tuber Lung Dis,1995,76(6)：555-562.

[4]Wayne LG,Hayes LG.Anin vitromodel fo r sequential study of shiftdown of Mycobacterium tuberculosis through two stages of nonreplicating persistence[J].Infect Immun,1996,64(6)：2062-2069.

[5]McKinney JD,H? ner zu Bentrup K,M u?oz-El í as EJ,Miczak A,Chen B,Chan WT,Swenson D,Sacchettini JC,Jacobs WR Jr,Russell DG.Persistence of Mycobacterium tuberculosis in macrophages and mice requires the glyoxylate shunt enzyme isocitrate lysate[J].Nature,2000,406(6797)：735-738.

[6]Cunningham AF,Spreadbury CL.M ycobacterial stationary phase induced by low oxygen tension：cell wall thickening and localization of the 16-kilodalton α-crystallin homolog[J].J Bacteriol,1998,180(4)：801-808.

[7]Mayanja-Kizza H,Wajja A,Wu M,Peters P,Nalugwa G,Mubiru F,Aung H,Vanham G,Hirsch C,Whalen C,Ellner J,Toossi Z.Activation of beta-chemokines and CCR5 in persons infected with human immunodeficiency virus ty pe 1 and tuberculosis[J].J infect Dis,2001,183(12)：1801-1804.

[8]Giosuè S,Casarini M,Ameglio F,Zangrilli P,Palla M,Altieri AM,Bisetti A.Aerosolized interferon-alpha treatment in patients with mulit-drug-resistant pulmonary tuberculosis[J].Eur Cytokine Netw,2000,11(1)：99-104.

[9]Rohde K,Yates RM,Purdy GE,Russell DG.My cobacterium tuberculosis and the environment within the phagosome[J].Immunol Rev,2007,219：37-54.

[10]Walburger A,Koul A,Ferrari G,Nguyen L,Prescianotto-Baschong C,Huy gen K,Klebl B,Thompson C,Bacher G,Pieters J.Protein kinase G from pathogenic mycobacteria promotes survival within macrophages[J].Science,2004,304(5678)：1800-1804.

[11]Robert Lee Hunter,Nandagopal Venkataprasad,Margaret R.Olsen.The role of trehalose dimycolate(cord factor)on morphology of virulentM.tuberculosis in vitro[J].Tuber-culosis,2006,86(5)：349-356.

[12]Condos R,Raju B,Canova A,Zhao BY,Weiden M,Rom WN,Pine R.Recombinant gamma interferon stimulates signal transduction and gene ex pression in alveolar macrophagesin vitroand in tuberculosis patients[J].Infect Immun,2003,71(4)：2058-2064.

[13]Imai K,Kurita-Ochiai T,Ochiai K.My cobacterium bovis bacillus Calmette-Guérin infection promotes SOCS induction and inhibits IFN-gamma-stimulated JAK/ST AT signaling in J774 macrophages[J].FEM S Immunol M ed Microbiol,2003,39(2)：173-180.

[14]Nagabhushanam V,Solache A,Ting LM,Escaron CJ,Zhang JY,Ernst JD.Innate inhibition of adaptive immunity：mycobacterium tuberculosis-induced IL-6 inhibits macrophages responses to IFN-gamma[J].J Immunol,2003,171(9)：4570-4577.

[15]Mackenne RK,Jones S,Museley A.In vivoexposure to bicarbonate/lactate-and bicarbonate-buffered peritoneal dialy sis fluids improvesex vivoperitoneal microphage function[J].Am J Kidney Dis,2000,35(1)：112-121.

[16]Pai RK,Pennini M E,T obian AA,Canaday DH,Boom WH,Harding CV.Prolonged toll-like receptor signaling by Mycobacterium tuberculosis and its 19-kilodalton lipo-protein inhibits gamma interferon-induced regulation of selected genes in macrophages[J].Infect Immun,2004,72(11)：6603-6614.

[17]汪正清.結(jié)核分枝桿菌抗拒巨噬細(xì)胞吞噬及在胞內(nèi)的生存機(jī)制[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2001,24(6)：375-377.

[18]Balcewicz-Sablinska MK,Kcane J,Kornfeld H,Remold HG.Pathogenic Mycobaterium tuberculosis evades apoptosis of host macrophages by release of TNF-R,resulting in inactivation of T NF-alpha[J].J immunol,1998,161(5)：2636-2641.

[19]Sly LM,Hingley-Wilson SM,Reiner NE,McMaster WR.Survival of Mycobacterium tuberculosis in host macrophages involves resistance to apoptosis dependent upon induction of anti-apoptotic Bcl-2 family member Mcl-1[J].J Immunol 2003,170(1)：430-437.

[20]Ismail AA,Walker PL,Cawood M L,Barth JH.Interference in immunoassay is an underestimated problem[J].Ann Clin Biochem,2002,39(4)：366-373.

[21]Rojas M,Garc í a LF,Nigou J,Puzo G,Olivier M.Mannosylated lipoarabinomannan antagonizes mycobacterium tuberculosis induced macrophage apoptosis by altering Ca+2-dependent cell signaling[J].J Infect Dis,2000,182(1)：240-251.

[22]Dahl JL,Arora K,Boshoff HI,Whiteford DC,Pacheco SA,Walsh OJ,Lau-Bonilla D,Davis WB,Garza AG.The relA Homolog of Mycobacterium smegmatis affects cell appearance,viability,and gene expression[J].J Bacteriol,2005,187(7)：2439–2447.

[23]Park HD,Guinn KM,Harrell MI,Liao R,V oskull MI,Tompa M,Schodnik GK,Sherman DR.Rv3133c/dosR is a transcription factor that mediates the hypoxic response of Mycobacterium tuberculosis[J].M ol Microbiol,2003,48(3)：833–843.

[24]Roth SY,Denu JM,Allis CD.Histone acetyltransferases[J].Annu Rev Biochem,2001,70：81-120.

[25]王火生,陳心春,李美忠.肺結(jié)核患者結(jié)核分支桿菌EIS抗原特異性細(xì)胞免疫的臨床研究[J].中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué),2006,18(8)：498-500.

[26]Lai CK,Ho S,Chan CH,Chan J,Choy D,Leung R,Lai KN.Cy tokine gene expression profile of circulating CD4+T cells in active pulmonary tuberculosis[J].Chest,1997,111(3)：606-611.

[27]Wayne LG,Sramek HA.M etronidazole is bactercidal to dormant cells of My cobacterium tuberculosis[J].Antimierob A-gents Chemother,1994,38(9)：2054-2058.

[28]Brooks jv,Furney SK,Orme IM.Metronidazole therapy in mice infected with tuber-culosis[J].Antimicrob Agents Chemother,1999,43(5)：1285-1288.

[29]Lenaerts AJ,Gruppo V,Marietta KS,Johnson CM,Driscoll DK,Tompkins NM,Rose JD,Reynolds RC,Orme IM.Preclinical testing of the nitroimidazop-yran PA-824 for activity against Mycobacterlum tuberculosis in a series ofin vitroandin vivomodels[J].Antimicrob Agents Chemother,2005,49(6)：2294-2301.

[30]Sharma V,Sharma S,Hoener zu Bentrup K,McKinney JD,Russell DG,Jacobs WR Jr,Sacchettini JC.Structure of isocitrate lyase,a persistence factor of Mycobacterium Tuberculosis[J].Nat Struct Biol,2000,7(8)：663-668.

[31]詹莉,戴華成,楊治平,易著文,成詩(shī)明,舒平.小毛莨內(nèi)酯對(duì)結(jié)核休眠菌感染患者 GLSmRNA表達(dá)的影響[J].中國(guó)防癆雜志,2001,23(5)：275-277.

重慶醫(yī)科大學(xué)科技創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目(XB200512)

李升錦(lsj1025@163.com)

2009-03-30)

(本文編輯：張曉進(jìn))