邱立疆，郁二蒙，吉 紅,3*，謝 駿*，王廣軍，夏 耘

(1.西北農(nóng)林科技大學 動物科技學院，陜西 楊凌 712100；2. 中國水產(chǎn)科學研究院 珠江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部熱帶亞熱帶水產(chǎn)資源利用與養(yǎng)殖重點實驗室， 廣東 廣州 510380；3. 西北農(nóng)林科技大學 安康水產(chǎn)試驗示范站，陜西 安康 725021)

生物絮團(Biofloc)是養(yǎng)殖水體中以異養(yǎng)微生物為主,經(jīng)生物絮凝作用結合水體中有機質(zhì)、原生動物、藻類、絲狀菌等形成的絮狀物[1]。作為新興的技術-生物絮團技術，生物絮團是其絮凝所得的副產(chǎn)品，含粗蛋白20%以上，粗纖維低于18%[2-5]，是一種非常規(guī)、價格低廉的蛋白飼料源。研究表明，生物絮團較益生菌可更好地促進南美白對蝦的生長[6]。用15N同位素標記生物絮團，發(fā)現(xiàn)南美白對蝦只能利用生物絮團總量的3%[7]，過量的絮團抑制水生動物的生長[8]。用生物絮團飼養(yǎng)羅非魚，濃度為DM∶14 mg/cm3的生物絮團最有利于羅非魚的生長[8-9]。也有學者用羅非魚養(yǎng)殖池塘中形成的絮團替代飼料原料中的魚粉或豆粕，發(fā)現(xiàn)一定水平(DM∶7.8%與15.6%)的替代可提高羅非魚的體重[10]。但在已有生物絮團替代餌料或者飼料原料的研究中，生物絮團作為蛋白原料在水產(chǎn)飼料中的最適添加量仍未明確。

項目已完成石坎坡改梯34.58hm2、沉沙凼50m3、排洪溝3879m、水土保持林 1011.96hm2、封禁治理 300hm2、農(nóng)村飲水900戶、田間道路94 446 m、機耕道 48 500 m、蓄水池 4 166.84 m3、渠道12 231 m、經(jīng)濟果木林796.90 hm2和沼氣池927座等。完成治理水土流失面積30.25 km2，為計劃數(shù)的79%。

為研究生物絮團的最佳使用水平，提高其菌體蛋白的利用率，本研究在鯽魚苗種基礎飼料中添加不同水平的生物絮團，研究生物絮團的添加對鯽魚生長性能、體成分及健康狀況的影響，為生物絮團技術背景下飼料資源合理利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用生物絮團(CP29.39%，EE2.32%)為本實驗室培養(yǎng)，魚粉(CP53.50%,EE10.70%)及其它飼料原料均購自于珠江水產(chǎn)研究所飼料廠，飼料各原料均粉碎過 80 目篩。

1.2 試驗魚及飼養(yǎng)管理

試驗鯽魚(Carassius cuvieri)來自大宗淡水魚類產(chǎn)業(yè)技術體系華南區(qū)南沙實驗基地；挑選規(guī)格一致的鯽魚放于水族箱(2401)中暫養(yǎng)兩周，同時飼喂含粗蛋白30%的商品飼料。預試驗結束后，挑選體重(3.24±0.27) g，體長(4.52±0.51) cm的健康鯽魚300尾，飼養(yǎng)于水族箱中，每缸25尾魚，飼養(yǎng)周期為8周。

1.3 試驗飼料

(終末魚體重量+死亡魚體重量-初始魚體重量)/初始魚體重量×100

各原料按比例混勻后用飼料制條機(F-26型雙螺桿擠條機)壓制成直徑 1.5 mm飼料條，然后用制粒機(G-500型造粒機)制成長3 mm的顆粒，制成的飼料晾干后放于冰箱冷藏保存，隨用隨?。辉囼烇暳吓浞郊盃I養(yǎng)成分見表1。

1.4 樣品采集與分析

表1 試驗飼料配方及營養(yǎng)成分組成(干物質(zhì)，%)Table 1 Formulations and proximate compositions(DM,%)

注：①微生物預混料(mg·kg-1):維生素A 300 IU,維生素D3400 IU,維生素E 3 mg，維生素K32.5 mg,維生素B10.25 mg，維生素B20.25 mg，維生素B60.25 mg，維生素B120.096 mg，泛酸鈣 1.2 mg，煙酰胺 0.7 mg，葉酸 0.032 mg，生物素 0.05 mg，肌醇 5 mg，維生素C-酯 8 mg，維生素混合物載體為玉米蛋白粉；②礦物預混料(mg·kg-1):鐵 280 mg,銅1.92 mg,鋅 64 mg,錳 92 mg,鈷 0.8 mg,碘 0.8 mg,硒 0.16 mg。無機鹽混合物載體為沸石粉。

Notes:①Vitamin premix(mg·kg-1):vitamin A 300 IU,vitamin D3400 IU,vitamin E 3 mg,vitamin K32.5 mg,vitamin B10.25 mg,vitamin B20.25,vitamin B60.25 mg,vitamin B120.096 mg,Calcium pantothenate 1.20 mg,Nicotinic acid 0.7 mg,floc acid 0.032 mg,biotin 0.05 mg,inositol 5.00 mg,ascorby1-2-monophosphate 8 mg,corn gluten meal was used as a carrier;②Mineral premix(mg·kg-1)：Fe 280 mg,Cu 1.92 mg,Zn 64 mg,Mn 92 mg,Co 0.8 mg,I 0.8 mg,Se 0.16 mg，zeolite powder was used as a carrier.

特定生長率(specific growth rate,SGR,%/d)=(ln終末魚體重量-ln初始魚體重量) ×100/飼養(yǎng)天數(shù)

成活率(survival ratio,SR,%)=

(終末魚數(shù)量/開始魚數(shù)量)×100

從不同水平生物絮團添加對鯽魚生長(見表2)和生物學性狀(見表3)影響結果發(fā)現(xiàn)，隨著生物絮團添加量的增加，4個處理組間的成活率沒有顯著差異(P>0.05)；鯽魚的末均重、增重率、特定生長率都是呈先升高后下降的變化趨勢，且Ⅱ組的末均重，增重率，特定生長率顯著高于其它組(P<0.05)；末均重Ⅲ組與Ⅳ組沒有顯著差異(P>0.05)，但是顯著低于Ⅰ組(P<0.05)；增重率Ⅳ組顯著低于其它各組(P<0.05)，Ⅲ組顯著低于Ⅰ組和Ⅱ組(P<0.05)。Ⅱ組飼料系數(shù)顯著低于其它各組(P<0.05)，Ⅲ組與Ⅳ組沒有顯著差異(P>0.05)，但都顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。絮團不同水平添加對鯽魚生物學性狀的脂肪指數(shù)、腸指數(shù)和脾臟指數(shù)均沒有顯著影響(P>0.05)；而Ⅱ組肝指數(shù)則顯著低于其它各組，Ⅲ組與Ⅳ則沒有顯著差異(P>0.05)，但是它們都顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；Ⅱ組肥滿度顯著高于其余各組(P<0.05)。

配方參考解綬啟鯽魚飼養(yǎng)試驗飼料配方[11]。試驗所用生物絮團是在室內(nèi)水泥池中，對草魚飼以粗蛋白30%某商品飼料，外加碳源(葡萄糖)調(diào)節(jié)碳氮比為20∶1，24 h不斷充氧的條件下培養(yǎng)而成；當絮團總固體懸浮物濃度為200 mg/L時，用200目篩絹網(wǎng)收集并風干；生物絮團的營養(yǎng)成分(干物質(zhì))：粗蛋白(29.39±0.42)%，脂肪(2.32±0.07)%，粗纖維(1.22±0.03)%，無氮浸出物(38.60±0.46)%，灰分(17.80±0.32)%，水分(11.50±0.35)%，飼料各原料均粉碎過 80 目篩。

樣品采集前試驗魚饑餓24 h；每尾試驗魚測量體重、全長及體長，每缸隨機取15尾魚用MS-222麻醉，另隨機取 3 尾魚采用組織搗碎機進行勻漿作為全魚樣本，其它魚解剖測量腸長、稱空殼重、肝胰臟重、脾臟重及腸重；取肝胰臟組織迅速置液氮中保存，隨后轉至-20 ℃冰箱保存待用。采用以下公式計算鯽魚生長性能和生物學性狀：

肝胰臟指數(shù)(hepatosomatic index，HIS,%)=肝胰臟重/體重量×100

飼料系數(shù)(feeding conversion ratio，F(xiàn)CR,%)=投飼總量/(終末魚體重量+死亡魚體重量-初始魚體重量)

腸指數(shù)(intestine index，%)=腸重/體重量×100

肥滿度(condition factor ,CF,g/cm3)=全魚重量/體長3×100

1.3.3 相關知識掌握度評估 采用本院自制的量表進行評估，滿分100分，包括熱量換算、飲食搭配、禁止食用等，掌握度高：評分在92分以上；掌握度一般：評分在70～92分之間；未掌握度：評分在70分以下。

1.2.4 妊娠結局隨訪 打電話對所有孕婦妊娠結局追蹤隨訪或查閱本院電子病歷，包括孕期超聲篩查結果、妊娠結局、新生兒體檢的外貌、結構、智力發(fā)育等。

原文：But he never said a word to Amelia that was not kind and gentler;or thought of a want of hers that he did not try to gratify.譯文一：可是他對愛米麗亞總是溫柔體貼，千依百順。

脾臟指數(shù)(spleen index， %)=脾臟重/全魚重×100

脂肪指數(shù)(fat index， %)=腹腔脂肪重/全魚重×100

焦慮癥是比較多見的精神科疾病,每年該疾病發(fā)病率都在增加,人們的正常生活、學習和工作受到了極大的影響,導致生存質(zhì)量下降[3-6]。目前臨床中采取的藥物和心理治療方式是主要的方法,可是治療效果不是十分理想,因為焦慮癥患者的病情比較復雜,發(fā)病機制還不清楚,單一模式治療的難度比較大[3]。

干物質(zhì)測定采用恒溫干燥法(105 ℃)；蛋白質(zhì)采用凱氏定氮法測定；脂肪采用索氏抽提法測定；灰分測定采用馬福爐灼燒法(550 ℃)；肝臟組織抗氧化指標采用南京建成生物工程研究中心生產(chǎn)的試劑盒測定。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗結果用“平均值±標準差”(mean±SD)表示。數(shù)據(jù)用SPSS18.0軟件中的獨立樣本單因素Duncan's方法進行多重比較，以P<0.05 為顯著差異水平，P<0.01為極顯著差異水平。

2 結果與分析

2.1 生物絮團添加對鯽魚生長的影響

增重率(weight gaining rate,WGR,%)=

表2 不同水平生物絮團添加對鯽魚生長影響Table 2 Effects of different levels of biofloc addition on growth performance of Carassius cuvieri

注：同行肩標不同小字字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

Note:Values with different lowercase superscripts in the same column show significant difference(P<0.05).The same below.

表3 不同水平生物絮團添加對鯽魚生物學性狀的影響Table 3 Effects of different levels of biofloc addition on biological parameters of Carassius cuvieri

2.2 生物絮團添加對鯽魚常規(guī)成分的影響

不同水平絮團添加對鯽魚全魚、肌肉和肝胰臟的常規(guī)成分的影響結果見表4。由表4可知，各試驗組全魚和肝胰臟水分含量沒有顯著差異(P>0.05)，Ⅱ組肌肉水分顯著高于其它組(P<0.05)，Ⅰ組和Ⅲ組沒有顯著差異(P>0.05)，但顯著高于Ⅳ組(P<0.05)；對照組Ⅰ全魚和肝胰臟粗脂肪顯著高于其它組(P<0.05)，而各處理組沒有顯著差異(P>0.05)，肌肉中粗脂肪沒有顯著差異(P>0.05)；全魚粗蛋白各處理組顯著低于對照組Ⅰ(P<0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組沒有顯著差異(P>0.05)，但顯著高于Ⅳ組(P<0.05)；肌肉中粗蛋白隨著絮團添加量的增加，各處理組呈顯著上升趨勢(P<0.05)，且均顯著高于對照組(P<0.05)；肝胰臟粗蛋白Ⅱ組顯著高于其它試驗組組(P<0.05)。各處理組全魚，肝胰臟灰分顯著高于對照組(P<0.05)，而肌肉中灰分則沒有顯著差異(P>0.05)。

表4 不同水平生物絮團添加對鯽魚體成分的影響Table 4 Effects of different levels of biofloc addition on body composition of Carassius cuvieri %

2.3 生物絮團添加對鯽魚肝臟抗氧化指標的影響

鯽魚肝胰臟組織抗氧化指標(見表5)，T-SOD，GST， CAT隨絮團添加量的上升，均處于先上升后下降趨勢，且Ⅱ組均顯著高于其它組(P<0.05)，各處理組均顯著高于對照組(P<0.05)；肝臟中MDA含量Ⅱ組顯著低于其余試驗組，而其余試驗組之間則沒有顯著差異(P>0.05)。

工程勘察中經(jīng)常出現(xiàn)不按照規(guī)定進行勘察，例如角點處出現(xiàn)過大的孔間距，達不到規(guī)定的孔深與孔距。在工程勘察流程中，因為對試驗取樣環(huán)境不夠了解，導致勘探過程中出現(xiàn)突發(fā)狀況。部分技術人員是在不考慮場地實際情況和土壤條件的情況下根據(jù)最低限度試驗抽樣，沒有對取樣、測試的均勻性與有效性進行全面考慮。

表5 不同水平生物絮團添加對鯽魚肝臟抗氧化指標的影響Table 5 Effects of different levels of biofloc addition on antioxidant index in hepatopancrease of Carassius cuvieri

3 討 論

3.1 生物絮團添加對鯽魚生長的影響

生物絮團作為蛋白源添加到飼料中的研究相對于其它蛋白源(棉粕，豆粕，菜粕，肉骨粉、羽毛粉等)較少，目前餌料替代研究主要集中在羅非魚、對蝦和鳙魚等[12-14]養(yǎng)殖中。本試驗結果顯示，當生物絮團添加量為10%時，鯽魚生長效果顯著優(yōu)于其它試驗組(P<0.05)，肥滿度也顯著高于其它各組(P<0.05)，而當絮團添加量上升時，鯽魚的生長受到抑制。有研究用生物絮團直接飼喂鳙，發(fā)現(xiàn)生物絮團對鳙的末均重，增重率，特定生長率，肥滿度顯著高于配合飼料組(P<0.05)[14]。將越冬羅非魚苗種放入生物絮團池，羅非魚的肥滿度顯著高于對照組(P<0.05)[15]。本研究中,10%添加組的肝指數(shù)顯著低于對照組和其它試驗組(P<0.05)，說明絮團的添加對鯽魚肝臟代謝有顯著影響(P<0.05)。用不同水平絮團替代蝦料中的魚粉和豆粕，處理組蝦的增重率和特定生長率顯著高于對照組(P<0.05)[10]，這與本試驗的結果一致。目前關于生物絮團促進水產(chǎn)動物生長的具體原因還不清楚，有研究者稱可能是生物絮團是菌類蛋白，其氨基酸組成有利于水生動物的吸收；生物絮團含有益生菌是促進生長的另一個原因[10,16-17]。研究發(fā)現(xiàn)生物絮團對鯽魚的脂肪指數(shù)、腸指數(shù)、脾臟指數(shù)沒有顯著影響，說明生物絮團的添加不會對鯽魚的生物學性狀(肥滿度和肝指數(shù)除外)產(chǎn)生顯著影響(P<0.05)。

3.2 生物絮團添加對鯽魚常規(guī)體成分的影響

常規(guī)成分含量是衡量飼料原料的利用率的一個重要因子，可為評價飼料原料優(yōu)劣提供參考。本試驗條件下的結果顯示，鯽魚全魚和肝臟的水分、肌肉中的粗脂肪及灰分均不會隨著絮團添加水平的升高而變化；而全魚中粗蛋白、脂肪顯著低于對照組(P<0.05)；灰分、肌肉中粗蛋白和肝臟中粗蛋白及灰分則顯著高于對照組(P<0.05)。研究用羽毛粉替代鯽魚飼料中魚粉，全魚中的水分也不受添加水平的影響，但處理組全魚粗蛋白顯著高于對照組(P<0.05)，這可能是因為羽毛粉含有較高的粗蛋白(CP∶70.91%)所致[18]。絮團組肌肉中粗蛋白顯著高于對照組(P<0.05)，說明生物絮團添加有利于蛋白在肌肉中的形成，這是因為生物絮團含有一定量的必需氨基酸(精氨酸2%，蛋氨酸0.5%、賴氨酸2.1%)[17],有利于氨基酸吸收。用水解棉粕替代鯽魚飼料中魚粉，全魚中粗蛋白顯著高于對照組(P<0.05)，而對脂肪含量沒有影響[19]；肝臟中粗蛋白結果顯示，過量添加導致肝組織中的蛋白含量顯著降低(P<0.05)，其原因未知；處理組全魚和肝臟的灰分含量顯著高于對照組(P<0.05)。解綬啟研究不同水平的藻粉(CP∶30.6%)添加對鯽魚全魚灰分含量顯示，發(fā)現(xiàn)處理組顯著高于對照組(P<0.05)，與本文結果一致[20]，猜測這可能與絮團含有較高的灰分有關。

3.3 生物絮團添加對鯽魚肝臟抗氧化指標的影響

生物絮團是一種混合單細胞蛋白原料[21],關于其對抗氧化性的研究尚未見報道，本研究結果顯示：生物絮團添加對肝臟T-SOD，GST、 CAT和MDA有顯著影響，添加10%時，其抗氧化性能得到提高，而過量添加抗氧化性能則受到抑制。此效果可能與生物絮團含有益生菌-芽孢桿菌[22]有關。在水體施用或者飼料中添加芽孢桿菌與對照組相比，處理組草魚肝臟總抗氧化力(T-AOC) 顯著升高(P<0.01), 而肝臟中丙二醛(MDA)含量顯著下降(P<0.01)[23-24]， 這與本文的研究結果一致。

1.1 對象 2011年10月選擇上海市長寧區(qū)6所2級醫(yī)院，按主管護師:護師:護士為1∶4∶5比例采用分層抽樣法中抽取護理人員200名。納入標準:具有國家規(guī)定的護士執(zhí)業(yè)證書;在臨床護理中能接觸到靜脈治療。200名護理人員中，職稱:主管護師21名，護師79名，護士100名;學歷:中專54名，大專115名，本科及以上31名。護齡:0～4年92名，5～9年36名，10～14年27名，15～19年14名 ，20年以上31名。

4 結 論

適量的生物絮團添加可以促進鯽魚生長，提高肝臟抗氧化性能，而過量添加則會抑制鯽魚生長和導致鯽魚肝臟受到應激脅迫。本研究結果顯示，生物絮團在鯽魚飼料中的添加量應該在10%左右。

參考文獻：

[1] Azim M E,Little D C,Bron J E.Microbial protein production in activated suspension tanks manipulating C: N ratio in feed and the implications for fish culture[J]. Bioresource Technology,2007,99 ( 9 ) :3 590-3 599.

[2] Azim M E, Little D C. The biofloc technology (BFT) in indoor tanks: Water quality biofloc composition and growth and welfare of Nile tilapia (Oreochromis niloticus)[J]. Aquaculture , 2008,283(1):29-35.

[3] Ballester E L C,Cavalli R O. Effect of biofloc technology (BFT) on the early postlarval stage of pink shrimp Farfantepenaeus paulensis: growth performance floc composition and salinity stress[J]. Aquaculture International,2011,19(5):891-901.

[4] Mohamed E,Megahed. The Effect of Microbial Biofloc on Water Quality Survival and Growth of the Green Tiger Shrimp ( Penaeus Semisulcatus ) Fed with Different crude Protein Levels[J]. Arabian Aquaculture Society, 2010,5(1):119-142.

[5] Kuhn D D, Lawrence A L, Boardman G D,et al. Evaluation of two types of bioflocs derived from biological treatment of fish effluent as feed ingredients for Pacific whiteshrimp,Litopenaeus vannamei[J].Aquaculture ,2010,303(1): 28-33.

[6] Yuniasari D,Ekasari J. Nursery culture performance of litopenaeus vannamei with probiotics addition and different C/N Ratio under laboratory condition[J]. Biosciences,2010, 17(3):115-119.

[7] Burford M,Thompson P J , McIntosh R P, et al. The contribution of flocculated material to shrimp (Litopenaeus vannamei) nutrition in a highintensity zeroexchange system[J]. Aquaculture ,2004,232(1): 525-537.

[8] Ray A J, Lewis B L, Browdy C L, et al. Suspended solids removal to improve shrimp (Litopenaeus vannamei) production and an evaluation of a plantbased feed in minimalexchange, superintensive culture systems[J]. Aquaculture , 2010,299(1):89-98.

[9] Avnimelech Y. Feeding with microbial flocs by tilapia in minimal discharge bio-flocs technology ponds[J]. Aquaculture , 2007,264(1): 140-147.

[10] Kuhn D D , Boardman G D , Lawrence A L, et al. Microbial floc meal as a replacement ingredient for fish meal and soybean protein in shrimp feed [J]. Aquaculture , 2009,296(1):51-57.

[11] Zhao M,Xie S, Zhu X, et al.Effect of inclusion of blue-green algae meal on growth and accumulation of microcystins in gibel carp (Carassius auratus gibelio)[J]. Appl Ichthyol,2006,22(1): 72-78.

[12] Asaduzzaman M, Rahman M M, Azim M E,et al. Effects of C/N ratio and substrate addition on natural food communities in freshwater prawn monoculture ponds[J]. Aquaculture, 2010,306(1):127-136.

[13] 岳 強,李彥芹,曹杰英, 等.生物絮團對中華鋸齒米蝦生長及水質(zhì)的影響[J]. 河北漁業(yè),2012(2):3-6.

[14] 李朝兵,王廣軍,余德光, 等.生物絮團對鳙生長、肌肉氨基酸成分及營養(yǎng)評價的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學,2012,40(11):242-245.

[15] Avnimelech Y. Feeding with microbial flocs by tilapia in minimal discharge bio-flocs technology ponds[J]. Aquaculture , 2007,264(1):140-147.

[16] Bairagi A, Sakar Ghosh K, Sen S K, et al.Enzyme producing bacterial flora isolated from fish digestive tracts[J]. Aquacult Int,2002,10(2):109-121.

[17] Kesarcodi Watson A, Kaspar H, Lategan M J, et al. Probiotics in aquaculture: the need principles and mechanisms of action and screening processes[J]. Aquaculture, 2008，274(1)：1-14.

[18] YongYang, Shouqi Xie,Yibo Cui, et al. Partial and total replacement of fishmeal with poultry by-product meal in diets for gibel carp Carassius auratus gibelio Bloch[J]. Aquaculture Research, 2006,37(1):40-48.

[19] Dan Gui,Wenbin Liu, Xianping Shao, et al. Effects of different dietary levels of cottonseed meal proteinhydrolysate on growth digestibility body composition and serum biochemical indices in crucian carp (Carassius auratus gibelio)[J]. Animal Feed Science and Technology,2010 ,156(1):112-120.

[20] Zhao M,Xie S,Zhu X, et al.Effect of inclusion of blue green algae meal on growth and accumulation of microcystins in gibel carp (Carassius auratus gibelio)[J]. Appl Ichthyol,2006,22(1): 72-78.

[21] Avnimelech Y. Carbon nitrogen ratio as a control element in aquaculture systems[J].Aquaculture, 1999,176(3):227-235.

[22] 夏 耘,郁二蒙,謝 駿, 等.基于PCR-DGGE技術分析生物絮團的細菌群落結構[J].水產(chǎn)學報,2012, 36(10):1 563-1 571.

[23] 李衛(wèi)芬,張小平,宋文輝, 等.養(yǎng)殖水體中添加芽孢桿菌對草魚免疫和抗氧化功能的影響[J].中國水產(chǎn)科學,2012,19(6): 1 027-1 033.

[24] 李衛(wèi)芬,鄧 斌,陳南南, 等.芽孢桿菌對草魚生長和腸粘膜抗氧化功能及養(yǎng)殖水質(zhì)的影響[J].水生態(tài)學雜志,2012,33(1):65-70.