趙有績(jī)

（青島萊西市店埠鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)與科技服務(wù)中心，山東萊西266607）

目前，我國(guó)的農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留污染問(wèn)題普遍存在，已成為影響水果和蔬菜安全的主要危害因素。對(duì)市場(chǎng)蔬菜農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，有利于控制蔬菜的安全性，確保人們能夠吃到安全放心的蔬菜。一般而言，蔬菜農(nóng)藥殘留常規(guī)檢測(cè)方法需要較長(zhǎng)的時(shí)間，而運(yùn)用農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)則可以在較短時(shí)間內(nèi)得到檢測(cè)結(jié)果。這就為加強(qiáng)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，對(duì)蔬菜的安全性監(jiān)管，保障人民群眾的飲食安全，推動(dòng)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)綠色高效發(fā)展具有重要意義?？梢姡姹ＷC上市蔬菜的安全就必需要通過(guò)快速檢測(cè)方法，檢測(cè)、分析蔬菜中的農(nóng)藥殘留情況，對(duì)蔬菜的安全性進(jìn)行監(jiān)管，本文闡述了速測(cè)儀法的檢測(cè)原理、檢測(cè)步驟及使用時(shí)的注意事項(xiàng)。

1 速測(cè)儀原理及使用方法

1.1 檢測(cè)原理

農(nóng)藥殘留速測(cè)儀是根據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T 5009.199-2003采用酶抑制原理和光電比色法原理研制而成的一種快速檢測(cè)儀器，是通過(guò)乙酰膽堿酶受到抑制的程度，判斷蔬菜中有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留情況。蔬菜中常見的有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)昆蟲的中樞起到一定的抑制作用，當(dāng)昆蟲的神經(jīng)系統(tǒng)中存在乙酰膽堿酶時(shí)，其活性會(huì)受到這兩類農(nóng)藥的影響，從而使乙酰膽堿不能正常的傳導(dǎo)，導(dǎo)致昆蟲中毒死亡。所以，當(dāng)蔬菜中不含有這些類別的農(nóng)藥時(shí)，乙酰膽堿酶的活性不會(huì)受到抑制。在試驗(yàn)過(guò)程中添加的底物會(huì)被乙酰膽堿酶水解得到相應(yīng)的產(chǎn)物，與顯色劑反應(yīng)顯現(xiàn)出特定的顏色。當(dāng)蔬菜中含有這些類別的農(nóng)藥時(shí)，底物就不會(huì)被水解，不會(huì)產(chǎn)生顯色反應(yīng)。然后，利用分光光度計(jì)，在412 nm處對(duì)吸光值隨時(shí)間的變化值進(jìn)行測(cè)定，可以得到相應(yīng)的抑制率，從而判斷出蔬菜中的農(nóng)藥殘留情況。當(dāng)抑制率低于50%時(shí)，說(shuō)明蔬菜中的農(nóng)藥殘留含量超標(biāo)，當(dāng)抑制率低于50%時(shí)，說(shuō)明蔬菜中農(nóng)藥殘留含量在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。

1.2 檢測(cè)步驟

首先，做好檢測(cè)前的準(zhǔn)備工作。先提取緩沖溶液，用1000 mL蒸餾水將每個(gè)小袋中的緩沖溶液進(jìn)行溶解。準(zhǔn)備乙酰膽堿酶，用10 mL的緩沖溶液溶解將乙酰膽堿酶溶解，并儲(chǔ)存在0～5℃的環(huán)境中。準(zhǔn)備碘化乙酰硫代膽堿作為底物，利用10 mL的蒸餾水將其溶解，在相同的溫度下儲(chǔ)存。準(zhǔn)備二硝基苯甲酸作為顯色劑，用10 mL的緩沖溶液將其溶解，同樣儲(chǔ)存在0～5℃的環(huán)境中。

其次，處理空白樣。取一個(gè)平底的小試管，在其中加入50 μL的酶、3 mL的緩沖溶液和50 μL的顯色劑。在常溫下放置15 min后，再向試管中加入50 μL底物，然后將試管中的溶液倒入比色皿中，再放進(jìn)儀器比色池中，按下“空白”鍵，經(jīng)過(guò)3 min，可以測(cè)得空白吸光度值。

再次，處理樣品。選取2～2.5 kg的蔬菜，將其分成3份，分別用于備案、復(fù)檢、檢測(cè)。選取表面比較干凈的2 g葉菜、4 g非葉菜，以及1片果菜。然后，將所選擇的蔬菜，切成小丁，放在小玻璃瓶中，向其中加入20 mL緩沖溶液，連續(xù)震蕩1～2 min后，將上清液倒入大試管中，放置3～5 min。向平底小試管中加入 50 μL 的酶、50 μL 的顯色劑和3 mL的樣本提取液，在常溫環(huán)境下放置15 min。向待測(cè)的平底小試管中加入50 μL底物，分別倒進(jìn)比色皿中，再將其放入儀器比色池中，按下“樣品”鍵。等待3 min，可測(cè)得樣品吸光度值和樣品抑制率。

最后，分析檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果用抑制率來(lái)表示的。

2 注意事項(xiàng)

2.1 檢查檢測(cè)儀器

在對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)前，要仔細(xì)的檢查儀器，檢查內(nèi)容如下：第一，儀器的光源是否正常；第二，在儀器中是否有遺留的樣品比色皿存在；第三，儀器是否能正常工作。在使用儀器的時(shí)候，要先開機(jī)預(yù)熱10 min，預(yù)熱直接按下空白鍵或者樣品鍵，過(guò)3 min后觀察結(jié)果，然后再進(jìn)行空白對(duì)照檢測(cè)和樣本檢測(cè)。

2.2 試劑的保存和使用

在試驗(yàn)過(guò)程中，酶試劑是最重要的，酶的活性影響測(cè)試結(jié)果決定著試驗(yàn)是否能成功。為確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性，必須要做好試劑的保存工作。所以，顯色劑、酶試劑等，都要放置在0～5℃的環(huán)境中。配置好的酶液、底物等，要在1周內(nèi)用完，顯色劑要在1個(gè)月內(nèi)用完，溶液的反復(fù)解凍次數(shù)不能超過(guò)2次，緩沖溶液可在常溫下保存。檢測(cè)室的溫度最好控制在20～30℃，經(jīng)過(guò)改進(jìn)后的酶，不需要放在37～38℃的保溫箱中培養(yǎng)，室溫培養(yǎng)即可。在22℃時(shí)，需要培養(yǎng)20 min，25℃以上時(shí)需要培養(yǎng)15 min。當(dāng)室溫低于20℃時(shí)，就需要將其放在37～38℃的保溫箱中培養(yǎng)。

2.3 取樣的正確性

在取樣時(shí)，要將抽樣工具和需要的容器清潔干凈，不能存在異味，否則會(huì)污染樣品，將樣品準(zhǔn)備好等待檢測(cè)。選擇均勻、可食用、具有代表性的部位取樣。在選取果菜類樣品時(shí)，要利用取樣器或者小刀，沿著果菜的表面，取1 cm厚的樣本。菠菜、甘藍(lán)等蔬菜的葉綠素含量比較高，在提取樣本時(shí)，可將整株蔬菜進(jìn)行浸提，以免樣本受到色素的干擾。茄子在切開后容易氧化，浸提時(shí)可直接用整個(gè)茄子或者切下一大塊，以免樣本被干擾。韭菜、香菜等蔬菜產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物，會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性。所以，在提取這些類型的蔬菜樣本時(shí)，也需要整株浸提。

3 實(shí)例

取大白菜、青菜等大葉蔬菜8～10片葉子，將每片葉子從中對(duì)分，一半棄掉，一半從中攔腰截?cái)?，取每片葉子的部分制樣。取豌豆尖這一小葉蔬菜，整株作為取樣單元，總共取100～150 g制樣。同時(shí)，取蘿卜、茄子、蔥頭等各100～150 g制樣。將每份樣品葉都貼上標(biāo)簽和編號(hào)，每瓶取2 g，放入500 mL的三角瓶中，制取浸提液。利用酶液和顯色液對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果的抑制率如果低于50%，說(shuō)明農(nóng)產(chǎn)品中的蔬菜殘留不超標(biāo)；如果抑制率超過(guò)50%，說(shuō)明農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留量超標(biāo)。當(dāng)抑制率超過(guò)40%時(shí)，應(yīng)進(jìn)行2次以上的重復(fù)檢測(cè)，保證重復(fù)檢測(cè)的重現(xiàn)性不低于80%。

4 小結(jié)

在蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)中，要先準(zhǔn)備好檢測(cè)所需的各種試劑和容器，準(zhǔn)備好檢測(cè)儀。選好樣品，再用乙酰膽堿酶對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)檢測(cè)儀器獲取檢測(cè)結(jié)果。

速測(cè)儀法在蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用，簡(jiǎn)單方便，只需30 min左右的時(shí)間就能完成，能夠彌補(bǔ)傳統(tǒng)檢測(cè)儀器分析方法的不足，實(shí)現(xiàn)對(duì)市場(chǎng)上的蔬菜、農(nóng)場(chǎng)中的蔬菜農(nóng)藥殘留情況進(jìn)行快速檢測(cè)，分析出蔬菜中的農(nóng)藥殘留量，使人們能夠食用到安全、放心的蔬菜。

速測(cè)儀法在檢測(cè)過(guò)程中同時(shí)也存在一定缺點(diǎn)，還需要進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行改進(jìn)。例如，酶試劑容易失去活性，一旦其活性不存在，就會(huì)影響檢測(cè)過(guò)程反應(yīng)的穩(wěn)定性，使檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)很大的誤差，從而降低其重復(fù)性檢測(cè)效果。此檢測(cè)方法的實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，確認(rèn)率通常只能達(dá)到60%～70%。并且，在檢測(cè)過(guò)程中還存在盲區(qū)，只能對(duì)兩類農(nóng)藥進(jìn)行檢測(cè)，一類是有機(jī)磷，一類是氨基甲酸酯，無(wú)法檢測(cè)出有機(jī)氯類農(nóng)藥、菊酯類農(nóng)藥和其他類農(nóng)藥。此外，速測(cè)儀法也不適合對(duì)蔥、蒜、番茄、胡蘿卜等14類農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，因?yàn)檫@些農(nóng)產(chǎn)品容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。速測(cè)儀對(duì)檢測(cè)人員的要求比較高，這些人員必須要經(jīng)過(guò)專業(yè)的培訓(xùn)，才能對(duì)檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行專業(yè)的判斷和處理，否則很容易得出錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果。