高效液相色譜法測(cè)定蛋制品中蘇丹紅含量

◎ 陳 潔

（寧德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，福建 寧德 352100）

蘇丹紅又名蘇丹，是一類人工合成的工業(yè)染料，有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ號(hào)4種[1-2]。該染料具有致癌性和致突變性，我國(guó)嚴(yán)令禁止將其用于食品加工中[3]。經(jīng)蘇丹紅染色后的食品色澤鮮艷且穩(wěn)定，不易掉色，因此一些無(wú)良商家違法將該染料添加至如辣椒粉、辣椒油、紅豆腐、紅心禽蛋等食品中。

GB/T 19681—2005利用高效液相色譜測(cè)定蘇丹紅含量，樣品經(jīng)中性氧化鋁柱凈化，操作過(guò)程不僅煩瑣，且回收率不高。目前，主要采用液相色譜法[4-7]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[8-12]、毛細(xì)管電泳法[13-14]、免疫分析法[15-17]以及各種電化學(xué)法[18-21]測(cè)定食品中蘇丹紅染料的含量。以上幾種檢測(cè)方法中，高效液相色譜儀價(jià)格相對(duì)便宜，操作簡(jiǎn)單，且精密度和準(zhǔn)確度高，使用比較普及。因此本研究以市售咸蛋、松花蛋為對(duì)象，利用蘇丹紅的親脂性，用強(qiáng)極性的有機(jī)溶劑作為提取液，旨在建立一種前處理簡(jiǎn)單、快速、高效的食品中蘇丹紅染料含量的HPLC-DAD分析檢測(cè)方法，進(jìn)一步完善蘇丹紅染料檢測(cè)體系，為食品中蘇丹紅染料的監(jiān)督檢驗(yàn)和殘留監(jiān)控提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ（濃度：100 μg·mL-1，壇墨質(zhì)檢-國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）。乙腈、丙酮，色譜純；醋酸銨，分析純；實(shí)驗(yàn)用水：一級(jí)水。實(shí)驗(yàn)所用蛋制品（皮蛋、咸鴨蛋）為市售。

1.2 儀器與設(shè)備

1260高效液相色譜儀，安捷倫科技（中國(guó)）有限公司；SQP電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；TDL-5-A高速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；WP-UP-YJ-20S超純水機(jī)，四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確移取蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 4種標(biāo)準(zhǔn)品各1.0 mL，丙酮定容至10 mL，得到10 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用乙腈稀釋成濃度為0.1～5.0 μg·mL-1系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取2 g（精確到0.001 g）樣品至50 mL具塞離心管中，加入提取液（90%丙酮水溶液）10.0 mL浸泡過(guò)夜。取出，超聲 30 min，8 000 r·min-1離心5 min。上清液經(jīng)0.45 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后上機(jī)測(cè)定。

1.3.3 色譜條件

色譜柱為Sepax Bio-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），A流動(dòng)相為0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液（每L 0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液添加6 mL 1‰（V/V）醋酸水溶液），B流動(dòng)相為乙腈，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)480 nm，進(jìn)樣量10 μL，柱溫40 ℃，梯度洗脫程序見表1。

表1 流動(dòng)相洗脫梯度表

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件優(yōu)化

將染料蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為10 μg·mL-1）進(jìn) 樣。在相同洗 脫 條 件 下，對(duì) 比 以0.02 mol·L-1醋酸銨和 0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液（每L 0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液添加6 mL 1‰（V/V）醋酸水溶液）作為流動(dòng)相時(shí)目標(biāo)物的洗脫效果。結(jié)果表明，以 0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液（每 L 0.02 mol·L-1醋酸銨水溶液添加6 mL 1‰（V/V）醋酸水溶液）作為流動(dòng)相時(shí)，可達(dá)到理想的分離效果，色譜圖見圖1。

圖1 蘇丹紅Ⅰ~Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品溶液的色譜圖

2.2 線性范圍及檢出限

配制目標(biāo)物混合系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（濃度為0.1 μg·mL-1、0.2 μg·mL-1、0.5 μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1和 5.0 μg·mL-1）， 并 在 1.3.3 色 譜 條件下上機(jī)測(cè)試，繪制4種目標(biāo)物工作曲線。根據(jù)GB/T 27417—2017標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證，本方法對(duì)于2.0 g樣品，定容至 10 mL，檢出限為 10 μg·kg-1，定量限為 30 μg·kg-1。

繪制目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)曲線。橫坐標(biāo)為目標(biāo)物濃度（X，μg·mL-1），縱坐標(biāo)為相應(yīng)的峰面積（Y），得到線性方程相關(guān)系數(shù)r2≥0.999 92，線性關(guān)系良好。具體見表2。

表2 蘇丹紅Ⅰ~Ⅳ的線性方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)表

2.3 加標(biāo)回收率及精密度

在空白樣品（咸蛋及松花蛋）中添加3種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，按照上述1.3.2樣品前處理方法及1.3.3色譜條件進(jìn)行6水平測(cè)定?；厥章蕿?9.1%～100.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.88%～1.4%，滿足GB/T 27404—2008的質(zhì)控要求，結(jié)果見表3。

表3 蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表（n=6）

2.4 樣品測(cè)定

運(yùn)用本研究建立的實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)市售的咸蛋、松花蛋各30批次進(jìn)行分析檢測(cè)，結(jié)果顯示蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ含量均低于檢出限（10 μg·kg-1）。

3 結(jié)論與討論

隨著經(jīng)濟(jì)和生活條件的改善，全社會(huì)對(duì)食品安全關(guān)注度也在不斷提升。而一些不法商家在利益的驅(qū)動(dòng)下，總能“推陳出新”地與科技斗智斗勇，在食品加工過(guò)程中添加禁用添加劑或?yàn)E用限用的添加劑，威脅人們“舌尖上的安全”。

蘇丹紅在極性強(qiáng)的溶劑中有很好的溶解性，因此本研究以90%丙酮水溶液作為提取劑，采用高效液相法同時(shí)測(cè)定市售咸蛋、松花蛋中4種蘇丹紅染料的含量，大大提高了前處理效率，精密度好、回收率高，滿足檢測(cè)要求，為進(jìn)一步完善蘇丹紅染料檢測(cè)體系提供了理論參考。

此次研究對(duì)市售咸蛋、松花蛋各30份樣品進(jìn)行了測(cè)定，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ含量均低于檢出限（10 μg·kg-1）。表明在法律和相關(guān)部門的監(jiān)管下，添加劑違規(guī)使用的情況有所好轉(zhuǎn)，但仍需要持續(xù)關(guān)注和監(jiān)測(cè)。同時(shí)，提醒消費(fèi)者應(yīng)盡量減少購(gòu)買顏色過(guò)分鮮艷的商品，發(fā)現(xiàn)有問(wèn)題的商品應(yīng)及時(shí)向有關(guān)部門舉報(bào)，全民共治，營(yíng)造全社會(huì)食品安全宣傳的良好氛圍。