龐國峰 山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局 266500

一例雞新城疫病毒感染的診斷

龐國峰 山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局 266500

2015年10月，某規(guī)模養(yǎng)殖場發(fā)生了一起肉雞的傳染性、快速死亡病例，發(fā)病雞表現(xiàn)出呼吸困難、下痢、病死率和死亡率較高、漿膜和黏膜出血等臨床特征，從臨床診斷疑似為新城疫病毒感染，無菌取病料送實驗室進(jìn)行PCR檢測和病毒分離鑒定等進(jìn)行確診，結(jié)合臨床診斷和實驗室診斷結(jié)果，最終確診該養(yǎng)殖場發(fā)生了新城疫病毒的感染。

新城疫病毒；感染；臨床診斷；實驗室診斷

雞新城疫毒病是由雞新城疫病毒引起的一種高度接觸性、急性、烈性傳染?。?］。該病感染的宿主范圍比較廣，雞、鴨、鵝、火雞、鵪鶉和鴿子等均易感［2］。病雞和帶毒雞是NDV的主要傳染源，可經(jīng)呼吸道和消化道傳播，一年四季都可發(fā)生，但以春秋季發(fā)病較多。該病傳播速度快、發(fā)病率和死亡率高，是目前危害我國養(yǎng)禽業(yè)最為嚴(yán)重的烈性傳染病之一和我國長期以來一直堅持免疫的主要傳染病之一［4］。2015年10月，某規(guī)模肉雞養(yǎng)殖場發(fā)生了一起以呼吸困難、下痢、病死率和死亡率較高以及漿膜和黏膜出血為主要特征的傳染病，經(jīng)臨床診斷、實驗室PCR檢測和病毒分離鑒定，最終確診為由新城疫病毒感染所致?，F(xiàn)將整個診斷過程介紹如下。

1　材料和方法

（1）主要試劑。一步法RT-PCR擴增試劑盒、DL2000 DNA Marker均購自寶生物（大連）工程有限公司，抗新城疫病毒陽性血清購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

（2）實驗室PCR檢測。將無菌采取病死雞的肝臟、脾臟和淋巴結(jié)等組織病料加滅菌生理鹽水研磨，反復(fù)凍融3次，12000r/分鐘離心5分鐘，取上清液參照參考文獻(xiàn)［5］中的方法提取基因組RNA，并按照其RTPCR擴增條件分別進(jìn)行新城疫強毒和弱毒的RTPCR檢測。

（3）SPF雞胚病毒分離。將上述處理的病毒上清液加入青霉素和鏈霉素，4℃作用6小時以上，之后將處理的樣品接種10日齡SPF雞胚，0.1mL/胚，置37℃孵化器內(nèi)培養(yǎng)120小時，24小時內(nèi)死亡的雞胚棄去，24～120小時死亡的雞胚4℃保存。

（4）雞胚病變觀察。120小時后收獲所有雞胚尿囊液，觀察接種雞胚的胚體病變情況。

（5）血凝試驗。取收獲的雞胚尿囊液做血凝試驗（HA）。

（6）病毒中和試驗。取收獲的雞胚尿囊液與等量抗雞新城疫病毒特異性血清混合，室溫中和1小時后，接種SPF雞胚10只，觀察120小時，觀察雞胚的胚體病變情況，收獲雞胚尿囊液做血凝試驗。

2　結(jié)果與分析

（1）臨床癥狀及剖檢變化。發(fā)病雞精神萎靡，眼半閉半睜，食欲下降，咳嗽，呼吸困難，有粘性鼻液，張口呼吸，病程短，2～5天死亡。剖檢可見全身黏膜出血，淋巴結(jié)腫大、出血，腺胃黏膜出血、壞死，盲腸扁桃體腫大、出血。

（3）RT-PCR檢測結(jié)果。組織病料經(jīng)新城疫強毒擴增引物可擴增出349bp的特異性條帶，與明文龍等［5］的報道完全一致。而組織病料經(jīng)新城疫弱毒擴增引物未擴增出任何特異性條帶。表明組織病料中含有新城疫強毒，而沒有新城疫弱毒。

（4）胚體病變觀察結(jié)果。接種后72～120小時，接種的雞胚陸續(xù)出現(xiàn)死亡，剖檢觀察死亡雞胚可見胚體全身出血，頭部、足趾和翅膀出血嚴(yán)重。

（5）血凝試驗（HA）結(jié)果。收獲的尿囊液對1％雞紅細(xì)胞的血凝效價為1∶1024。

（6）病毒中和試驗結(jié)果。雞胚尿囊液與抗雞新城疫病毒陽性血清中和后接種的雞胚至接種后120小時，10枚雞胚全部健活，剖檢雞胚未見病變。收獲其尿囊液做血凝試驗，對1％雞紅細(xì)胞無凝集性，表明分離毒株可被抗雞新城疫病毒陽性血清特異性中和。

（7）綜合診斷結(jié)果。結(jié)合臨床癥狀、剖檢病理變化等臨床診斷結(jié)果以及RT-PCR檢測、病毒分離、胚體病變觀察、分離毒株血凝試驗、分離毒株中和試驗等實驗室診斷結(jié)果，確診為此次疫病由新城疫病毒感染所致。

3　討論

新城疫病毒不僅對養(yǎng)禽業(yè)危害嚴(yán)重，也是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)健康發(fā)展的重要疾病之一，能夠造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。新城疫病毒的宿主范圍廣泛，由于野生飛禽的存在，病毒很難凈化，預(yù)防該病主要通過疫苗免疫接種和加強飼養(yǎng)場的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生，經(jīng)常消毒。新城疫病毒一旦在養(yǎng)殖場存在就很難根除，在雞群中長期存在，當(dāng)雞群免疫力下降時會引發(fā)疾病。疫苗免疫雞群也可以發(fā)生新城疫，常由于疫苗接種時受母源抗體的影響，接種疫苗后不能獲得免疫力，當(dāng)雞群中存在新城疫強毒時導(dǎo)致雞群發(fā)病。

［1］楊麗麗，鄒冬輝.新城疫病毒檢測方法的研究進(jìn)展［J］.吉林農(nóng)業(yè)，2015，（19）：90-91.