異構(gòu)酶

法的關(guān)鍵是蔗糖異構(gòu)酶(SIase),該酶亦稱異麥芽糖合酶、蔗糖α-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶和海藻糖合酶。蔗糖異構(gòu)酶主要通過微生物發(fā)酵獲得,如非食品安全級菌株大腸桿菌(Escherichiacoli)、食品安全級菌株枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)等。與非食品安全級菌株相比,食品安全級菌株不存在熱原和內(nèi)毒素等安全問題,其表達(dá)的酶制劑、抗體等可直接用于

生物合成的蔗糖異構(gòu)酶（sucrose isomerase，SIase，EC 5.4.99.11）將蔗糖分子中葡萄糖和果糖之間的α-1，2 糖苷鍵異構(gòu)化為α-1，6 糖苷鍵形成異麥芽酮糖和α-1，1 糖苷鍵形成海藻酮糖[13]。因此，蔗糖異構(gòu)酶是生物催化生成異麥芽酮糖和海藻酮糖最有效的生物酶制劑，通過蔗糖異構(gòu)酶生物轉(zhuǎn)化法實(shí)現(xiàn)異麥芽酮糖產(chǎn)業(yè)化受到人們越來越多的關(guān)注。作者綜述了蔗糖異構(gòu)酶的研究進(jìn)展，詳細(xì)介紹了SIase 的來源、三維結(jié)構(gòu)、催化機(jī)制、理性改造和異源

8）DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶(DNA topoisomerase，TOP)是一類能夠改變DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的酶，在細(xì)胞的一系列基礎(chǔ)生命活動如DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和染色體分離等過程中發(fā)揮著重要作用[1?2]。DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶在1971年被首次發(fā)現(xiàn)，命名為ω蛋白，即DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶Ⅰ，是大腸埃希菌Escherichia coli中能夠特異性地將負(fù)超螺旋DNA解旋的一種拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶[3?4]。根據(jù)DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶的功能和作用機(jī)制，可以將其分成Ⅰ型和Ⅱ型DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶，Ⅰ型TOP

核糖-5-磷酸異構(gòu)酶缺乏癥（Ribose 5-phosphate isomerase deficiency，RPID），是由2p11號染色體上RPIA基因突變導(dǎo)致的一種罕見的遺傳性白質(zhì)腦病，多為常染色體隱性遺傳，該病目前無特異性診斷方法，可根據(jù)臨床表現(xiàn)、頭顱腦影像學(xué)、血串聯(lián)質(zhì)譜、尿氣相色譜質(zhì)譜檢測及結(jié)合基因檢測診斷。為提高對本病的認(rèn)識，現(xiàn)回顧5例病例資料總結(jié)如下。1 病歷資料1.1 一般情況及病史女，1歲9月，因“步態(tài)不穩(wěn)”于2019年9月在安徽省兒童醫(yī)院

萄糖，經(jīng)葡萄糖異構(gòu)酶異構(gòu)得到果葡糖漿，果葡糖漿分離結(jié)晶得到果糖；也可直接選用葡萄糖產(chǎn)品異構(gòu)生成果葡糖漿，果葡糖漿分離結(jié)晶得到果糖；或者選用蔗糖水解生成果葡糖漿，果葡糖漿分離結(jié)晶得到果糖[9]。試驗(yàn)針對葡萄糖的異構(gòu)工藝進(jìn)行正交試驗(yàn)，并對異構(gòu)過程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室的模擬擴(kuò)大試驗(yàn)，整個(gè)連續(xù)異構(gòu)過程共異構(gòu)20 kg葡萄糖液，同時(shí)該試驗(yàn)的設(shè)計(jì)過程可與蔗糖生產(chǎn)結(jié)晶果糖的試驗(yàn)[10]作為實(shí)驗(yàn)室小型生產(chǎn)果糖的生產(chǎn)工藝，構(gòu)建一個(gè)完整的果糖生產(chǎn)架構(gòu)體系。1 材料與方法1.1 主要材料

前主要采用蔗糖異構(gòu)酶轉(zhuǎn)化蔗糖，再經(jīng)過濃縮和結(jié)晶等步驟獲得異麥芽酮糖[3-5]。現(xiàn)有蔗糖異構(gòu)酶生產(chǎn)菌普遍產(chǎn)酶水平低，因此研究人員主要將蔗糖異構(gòu)酶固載于水不溶性載體上，如以硅藻土為介質(zhì)進(jìn)行吸附固載[6]，利用海藻酸鈉-羧甲基纖維素鈉進(jìn)行混合包埋，利用殼聚糖-戊二醛吸附交聯(lián)、制備交聯(lián)酶聚集體等手段將蔗糖異構(gòu)酶制備成固定化酶[7]，以從反應(yīng)體系中分離回收和再利用，從而降低異麥芽酮糖的生產(chǎn)成本。然而，制備固定化酶需要利用色譜法分離純化大量可溶酶，并且需要載體材料和固

法中常用到蔗糖異構(gòu)酶，蔗糖異構(gòu)酶又被稱作異麥芽酮糖合成酶，是一種葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶。該酶以蔗糖為底物進(jìn)行異構(gòu)化反應(yīng)生成異麥芽酮糖和海藻酮糖兩種主要產(chǎn)物，同時(shí)水解蔗糖生成葡萄糖和果糖為副產(chǎn)物[5]。但目前利用蔗糖異構(gòu)酶進(jìn)行蔗糖轉(zhuǎn)化過程中仍存在諸如酶解副產(chǎn)物較多、多數(shù)蔗糖異構(gòu)酶的表達(dá)系統(tǒng)為非食品級、蔗糖異構(gòu)酶的表達(dá)水平及酶活性不高、蔗糖異構(gòu)酶的穩(wěn)定性不高等問題，這些問題嚴(yán)重阻礙了異麥芽酮糖的工業(yè)化生產(chǎn)與利用的進(jìn)程[6-8]。解脂耶氏酵母(Yarrowialipol

單胞菌中的木糖異構(gòu)酶可以將葡萄糖異構(gòu)化生成果糖。TSUMURA[14]和TAKASAKI等[15]先后發(fā)現(xiàn)了暗色產(chǎn)色鏈霉菌和白色鏈霉菌的葡萄糖異構(gòu)酶，可以將葡萄糖異構(gòu)化為果糖。已商業(yè)化的、用于HFS生產(chǎn)的葡萄糖異構(gòu)酶，一般在60 ℃左右催化，轉(zhuǎn)化率只能達(dá)到42%～45%，僅能用于HFS-42型高果糖漿的制備，要想獲得HFS-55型高果糖漿，還需進(jìn)行濃縮分離純化操作[16]。BHOSALE等[16]發(fā)現(xiàn)，溫度升高有利于葡萄糖異構(gòu)化生成果糖，可以獲得更高果糖濃

前主要的亞油酸異構(gòu)酶作用機(jī)理。Kishino等[18]首次確定了植物乳桿菌由三酶體系生產(chǎn)CLA；Yang Bo等[19]又對植物乳桿菌ZS2058的亞油酸異構(gòu)酶三段基因mcra、dh、dc進(jìn)行敲除，證明了由3 種組分亞油酸異構(gòu)酶催化生產(chǎn)CLA的獨(dú)特機(jī)制。Jenkins等[20]以碳標(biāo)記的亞油酸（linoleic acid，LA）為示蹤底物，得到亞油酸異構(gòu)酶參與LA氫化的過程，LA先異構(gòu)成CLA，最終產(chǎn)物為硬脂酸，證明CLA僅為該反應(yīng)的中間產(chǎn)物。易錯(cuò)聚合酶鏈

劑［1］。蔗糖異構(gòu)酶是一種高效的將蔗糖轉(zhuǎn)換成異麥芽酮糖的生物酶試劑，其高效專一，轉(zhuǎn)化效率高，但利用游離的蔗糖異構(gòu)酶作用時(shí)，其易失活、不穩(wěn)定、難以重復(fù)利用及效率低［2-3］。因此，一般選用將蔗糖異構(gòu)酶進(jìn)行固定化來解決這一問題。酶的固定化方法較多，主要有物理及化學(xué)法［4-5］，傳統(tǒng)的固定化方法雖可提高酶的穩(wěn)定性，但往往會導(dǎo)致酶活性的降低。近年來，酶的固定化載體材料已逐漸由高分子材料轉(zhuǎn)向納米材料［6-7］，因納米材料擁有較大的表面積及巨大的空間結(jié)構(gòu)，增加了酶的裝

211816)異構(gòu)酶(isomerase)是七大酶類中的第五種，以EC5分類號命名，催化分子內(nèi)的幾何或者結(jié)構(gòu)重排。可細(xì)分為差向異構(gòu)酶(epimerase)、消旋酶(racemase)、互變異構(gòu)酶(tautomerase)、變位酶(mutase)和順反異構(gòu)酶(cis-transisomerase)等。自然界常見的物質(zhì)如氨基酸和糖類都可能存在同分異構(gòu)體，其分子質(zhì)量相同，僅僅是原子空間排布不一致。它們彼此間?？赏ㄟ^異構(gòu)酶來實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化，異構(gòu)酶催化的反應(yīng)即異構(gòu)反應(yīng)(i

074)葡萄糖異構(gòu)酶(GIase)能將D-葡萄糖、D-木糖等轉(zhuǎn)化為D-果糖、D-木酮糖等相應(yīng)酮糖[1].它是工業(yè)上從淀粉大規(guī)模制備高果糖漿(HFCS)的關(guān)鍵酶[2-4]，其酶活的高低直接關(guān)系到高果糖漿的產(chǎn)量和生產(chǎn)成本.目前國產(chǎn)葡萄糖異構(gòu)酶主要問題是酶學(xué)性質(zhì)不理想，即酶活低，熱穩(wěn)定性差、耐受金屬離子的能力差.葡萄糖異構(gòu)酶大多數(shù)來自于細(xì)菌、放線菌，小部分來自真菌[5-6].因此，篩選和構(gòu)建高生產(chǎn)性能的商業(yè)用葡萄糖異構(gòu)酶一直是研究的熱點(diǎn).為獲得高產(chǎn)葡萄糖異構(gòu)酶的

優(yōu)化·肝素C5異構(gòu)酶的表達(dá)優(yōu)化及分子改造王兵兵1,2，周正雄1,2，金學(xué)榮1,2，李江華1,2，史仲平1,2，康振1,21 江南大學(xué) 生物工程學(xué)院 工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無錫 214122 2 江南大學(xué) 生物工程學(xué)院 糖化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無錫 214122肝素和硫酸乙酰肝素是一類應(yīng)用于臨床抗凝血的糖胺聚糖。肝素葡萄糖醛酸C5異構(gòu)酶(Heparosan-N-sulfate-glucuronate 5-epimerase，C5

生物合成的蔗糖異構(gòu)酶（EC 5.4.99.11，sucrose isomerase，SIase）以蔗糖為底物酶轉(zhuǎn)化生產(chǎn)異麥芽酮糖，催化作用反應(yīng)式如圖1。生物轉(zhuǎn)化法主要有細(xì)胞轉(zhuǎn)化法和酶轉(zhuǎn)化法兩種。細(xì)胞轉(zhuǎn)化法是直接發(fā)酵菌體或?qū)⒕w固定化來轉(zhuǎn)化蔗糖。生產(chǎn)強(qiáng)度低、菌體濃度低及易污染雜菌等問題是在利用細(xì)胞轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)異麥芽酮糖時(shí)無法避免的，而酶轉(zhuǎn)化法一般不存在上述問題，所以目前一般是將蔗糖異構(gòu)酶從微生物細(xì)胞中提取出來，再通過游離酶或固定化酶將蔗糖轉(zhuǎn)化為異麥芽酮糖。相比

，可以抑制拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶在機(jī)體內(nèi)的合成反應(yīng)【1】。1966年，國外醫(yī)藥學(xué)專家通過對天然產(chǎn)物進(jìn)行藥理學(xué)篩選，發(fā)現(xiàn)喜樹堿類物質(zhì)具有良好的抗腫瘤活性。喜樹堿最早發(fā)現(xiàn)于原產(chǎn)于我國本土植物喜樹的枝干和樹皮中，是傳統(tǒng)中醫(yī)治療惡性腫瘤的活性物質(zhì)。藥物化學(xué)領(lǐng)域的專業(yè)研究人員當(dāng)前已經(jīng)結(jié)合喜樹堿溶解度、抗癌活性及各種不良反應(yīng)等情況合成出了許多結(jié)構(gòu)相似的衍生物。這些結(jié)構(gòu)相似的衍生物可以有效降低喜樹堿自身的生物毒性，提高抗腫瘤療效【2】。目前部分喜樹堿類衍生物已經(jīng)被批準(zhǔn)上市，例如拓?fù)?/div>

新生代 2019年8期2019-10-28

制與現(xiàn)有的拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1抑制劑類藥物類似，但具有更強(qiáng)的殺滅癌細(xì)胞能力。拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1是一種對DNA復(fù)制起到至關(guān)重要作用的基礎(chǔ)酶。它可與DNA分子結(jié)合形成一個(gè)復(fù)合物并裂解DNA的一條鏈，使DNA分子從螺旋狀展開。當(dāng)DNA分子展開后，拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1會重新加入被裂解的DNA鏈?zhǔn)蛊湫迯?fù)并復(fù)制。癌細(xì)胞增殖能力遠(yuǎn)超健康細(xì)胞， 其中產(chǎn)生的拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1數(shù)量也遠(yuǎn)超正常細(xì)胞，因此拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1可與DNA分子形成更多復(fù)合物?，F(xiàn)有的拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1抑制劑類抗癌藥物只能短暫困住這種復(fù)合物，約2

物比現(xiàn)有的拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1抑制劑類藥物具有更強(qiáng)的殺滅癌細(xì)胞的能力。新喹啉衍生物針對抗癌功效的實(shí)驗(yàn)將交由印度科學(xué)培育協(xié)會完成。研究人員在實(shí)驗(yàn)室培育乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌和結(jié)腸癌等癌細(xì)胞系，用于對新合成化合物抑制拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1活性和殺死癌細(xì)胞的效果進(jìn)行測試。結(jié)果顯示，新喹啉衍生物可將拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1與DNA分子形成的復(fù)合物困住長達(dá)5個(gè)小時(shí)，抑制功效明顯好于現(xiàn)有藥物。參與研究的阿林達(dá)姆·塔盧克達(dá)爾博士表示：“當(dāng)拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1和DNA處于分離狀態(tài)，化合物不會與它們發(fā)生反應(yīng)或結(jié)

LX3的蔗糖異構(gòu)酶PalI，能夠催化蔗糖生成83%的異麥芽酮糖(α-D-glucosylpyranosyl-1,6-D-fructofranose)和21%海藻酮糖(α-D-glucosylpyranosyl-1,1-D-fructofranose)[5]，故可以作為一種良好的異麥芽酮糖產(chǎn)生酶。在異麥芽酮糖生產(chǎn)中，核心問題為產(chǎn)物的純化分離，使用游離酶進(jìn)行生產(chǎn)發(fā)酵會增加產(chǎn)物分離難度，蔗糖異構(gòu)酶的固定化成為解決問題的途徑之一，但是近年來卻少有相關(guān)成果的報(bào)道。

制與現(xiàn)有的拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1抑制劑類藥物類似，但它們具有更強(qiáng)的殺滅癌細(xì)胞能力。拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1是一種對脫氧核糖核酸（DNA）復(fù)制至關(guān)重要的基礎(chǔ)酶。它可與DNA分子結(jié)合形成一個(gè)復(fù)合物并裂解DNA的一條鏈，使DNA分子從螺旋狀展開。當(dāng)DNA分子展開后，拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1會重新加入被裂解的DNA鏈?zhǔn)蛊湫迯?fù)并復(fù)制。癌細(xì)胞增殖能力遠(yuǎn)超健康細(xì)胞，其中產(chǎn)生的拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1數(shù)量也遠(yuǎn)超正常細(xì)胞，因此拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1可與DNA分子形成更多復(fù)合物?，F(xiàn)有拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶1抑制劑類抗癌藥物具有捕獲上述復(fù)合物能

糖化酶和葡萄糖異構(gòu)酶的作用而生成的。高果糖漿相對于蔗糖具有甜度高、風(fēng)味佳、溶解度高、價(jià)格低等優(yōu)勢［2］，因此成為目前主要的甜味劑，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等行業(yè)。近年來，國內(nèi)外高果糖漿的需求量不斷增加，日本年消耗食糖總量為250萬t左右，而淀粉糖占其中的50% 以上；美國人均食糖消費(fèi)69 kg/a，淀粉糖占38 kg/a 以上。我國由于大量外資食品企業(yè)的進(jìn)入、食品工業(yè)的快速發(fā)展以及醫(yī)藥市場的大量開發(fā)，也極大地?cái)U(kuò)大了對高果糖漿產(chǎn)品的需求。根據(jù)果糖含量，目前市場上

2 DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶消除正超螺旋DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶的主要功能是消除正超螺旋。DNA復(fù)制過程中復(fù)制叉向前移動會積累巨大的張力，致使DNA分子的雙螺旋變緊，即產(chǎn)生正超螺旋，阻礙了DNA的解旋和復(fù)制。DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶分為DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶Ⅰ和DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶Ⅱ，DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶Ⅰ斷開一條DNA鏈上的磷酸二酯鍵，而DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶Ⅱ作用于兩條DNA鏈上的磷酸二酯鍵，使單鏈或雙鏈DNA片段適當(dāng)旋轉(zhuǎn)舒展DNA鏈，再連接磷酸二酯鍵，達(dá)到釋放張力的目的。因此，DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶

定L-阿拉伯糖異構(gòu)酶的研究王靜1，2，揣玉多2，湯衛(wèi)華2，侯婷2（1.天津市輕工業(yè)化學(xué)研究所有限公司，天津300350；2.天津現(xiàn)代職業(yè)技術(shù)學(xué)院，天津300350）以海藻酸鈉為載體，戊二醛為交聯(lián)劑，對L-阿拉伯糖異構(gòu)酶進(jìn)行固定化。研究海藻酸鈉濃度、氯化鈣濃度、戊二醛濃度以及硬化時(shí)間等因素對固定化效果的影響。結(jié)果表明最佳固定化條件為：海藻酸鈉濃度3.5%，氯化鈣濃度3.0%，戊二醛濃度0.2%，硬化時(shí)間7 h，該條件下制備的固定化酶與游離酶相比，最適宜反應(yīng)溫

理，優(yōu)化參數(shù)為異構(gòu)酶用量6.5 mg/g，溶液pH值7.5，異構(gòu)溫度74℃，異構(gòu)時(shí)間40 h；且異構(gòu)化所得果糖含量的實(shí)測值為37.51%，與理論值的相對誤差為1.49%，差異不顯著。精制所得的高果糖漿甜味柔和，接近F42型高果糖漿產(chǎn)品要求。馬鈴薯淀粉；多酶體系；淀粉水解；葡萄糖異構(gòu)化高果糖漿（High-fructose syrup）口感純正、吸濕與保潮性好，是高甜度的淀粉糖，可以補(bǔ)充蔗糖供應(yīng)量的不足，供糖尿病患者食用。高果糖漿因其具有以上獨(dú)特的性能，被消費(fèi)

酶C促進(jìn)葡萄糖異構(gòu)酶在大腸桿菌中的胞外表達(dá)姜 琪， 宿玲恰， 吳 敬， 陳 晟*（食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江南大學(xué)，江蘇 無錫 214122）磷脂酶C（PLC）能夠水解細(xì)胞膜主要成分磷脂，使細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)，從而能夠釋放出胞內(nèi)物質(zhì)。作者構(gòu)建了PLC與天然胞內(nèi)定位蛋白葡萄糖異構(gòu)酶（GI）共表達(dá)的重組大腸桿菌，搖瓶發(fā)酵胞外上清液中GIC酶活達(dá)到3.4 U/mL，占胞外和胞內(nèi)總酶活的93%，表明GIC成功實(shí)現(xiàn)了胞外表達(dá)。將胞外上清液中的GIC進(jìn)行分離純化和

CZ磷酸甘露糖異構(gòu)酶基因的克隆表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究張 瑤,崔堂兵*,宋 妍(華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院,廣東廣州 510006)將蠟狀芽孢桿菌CZ中的磷酸甘露糖異構(gòu)酶基因(pmi)進(jìn)行克隆,并在大腸桿菌中進(jìn)行異源表達(dá)。將PCR擴(kuò)增得到的pmi基因與pET-22b(+)表達(dá)載體進(jìn)行連接,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)中,構(gòu)建重組菌株BL21-pET22b(+)-pmi,并成功表達(dá)了重組磷酸甘露糖異構(gòu)酶。結(jié)果顯示:克隆得到pmi基因序列全長為948 bp,編

葡萄糖6-磷酸異構(gòu)酶在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的診斷價(jià)值蓋楠楠目的：分析葡萄糖6-磷酸異構(gòu)酶(G6PI)在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)中的診斷價(jià)值。方法：選取125例RA患者作為研究對象,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測125例RA患者、67例其他風(fēng)濕病患者、39例健康對照者的血清G6PI濃度，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；將RA患者的血清G6PI濃度與關(guān)節(jié)疼痛數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、類風(fēng)濕因子、血沉進(jìn)行Spearman等級相關(guān)性分析。結(jié)果：經(jīng)t或χ2檢驗(yàn)，RA患者活動期血清G6PI濃度3

術(shù)分散泛菌蔗糖異構(gòu)酶在大腸桿菌中的表達(dá)及發(fā)酵優(yōu)化劉軍彤1，2，吳敬1，2，陳晟1，21 江南大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無錫 214122 2 江南大學(xué) 生物工程學(xué)院 工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無錫 214122劉軍彤， 吳敬， 陳晟. 分散泛菌蔗糖異構(gòu)酶在大腸桿菌中的表達(dá)及發(fā)酵優(yōu)化. 生物工程學(xué)報(bào)， 2016， 32（8）: 1070-1080.Liu JT， Wu J， Chen S. Expression and produc

為重要。亞油酸異構(gòu)酶（linoleate isomerase,LA）是一種能夠催化亞油酸生成共軛亞油酸的酶，獲得高活性的亞油酸異構(gòu)酶是生產(chǎn)高活力、高純度共軛亞油酸的瓶頸。許多微生物體內(nèi)有亞油酸異構(gòu)酶，但這些微生物大多是厭氧菌，直接用這些微生物發(fā)酵生產(chǎn)CLA，條件難以控制；LAI為胞內(nèi)酶，產(chǎn)量低，且結(jié)合在細(xì)胞膜上，分離純化困難，制約了酶法生產(chǎn)CLA。所以，利用基因工程手段構(gòu)建高效表達(dá)亞油酸異構(gòu)酶基因的工程菌株[2]來獲得LAI顯得尤為重要。前人構(gòu)建的重組工程

6-7］。蔗糖異構(gòu)酶(EC 5.4.99.11)，也稱異麥芽酮糖合酶，是生物法轉(zhuǎn)化蔗糖生成異麥芽酮糖和海藻酮糖最合適的酶，該酶轉(zhuǎn)化蔗糖的主產(chǎn)物是異麥芽酮糖，同時(shí)轉(zhuǎn)化過程中伴隨少量單糖(葡萄糖和果糖)的生成［8-14］。1995年，Ralf等人首次將來源于 Protaminobacter rubrum CBS 547.77的蔗糖異構(gòu)酶在E.coli中進(jìn)行了成功的表達(dá)［15］;2010年，Park等實(shí)現(xiàn)了Enterobacter sp.的蔗糖異構(gòu)酶編碼基因在L

715)葡萄糖異構(gòu)酶(Glucose isomerase，簡稱 GI)，能將D-木糖、D-葡萄糖、D-核糖等醛糖轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酮糖，是工業(yè)上大規(guī)模制備果葡糖漿的關(guān)鍵轉(zhuǎn)化酶［1-2］。因果葡糖漿具有溶解度高、保濕性好、抗結(jié)晶性好及風(fēng)味濃郁等特點(diǎn)，現(xiàn)作為甜味劑已逐步取代了蔗糖的地位［3-4］。隨著果葡糖漿使用量增長，國內(nèi)外市場上對葡萄糖異構(gòu)酶的需求也在不斷增加;然而葡萄糖異構(gòu)酶在應(yīng)用過程中存在酶活性低、再生困難、壽命短及價(jià)格昂貴等問題，極大地限制了其工業(yè)化應(yīng)用，

)靶向抑制拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶和端粒酶的釕配合物研究進(jìn)展陳相巢暉＊計(jì)亮年＊(中山大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院生物無機(jī)與合成化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州510275)金屬配合物抗腫瘤研究，尤其是鉑類藥物，已取得了相對令人矚目的成功，但同時(shí)也面臨著包括耐藥性和毒副作用等諸多問題。近年來釕配合物作為新的抗癌藥物引起了人們的注意。在非鉑系藥物中，金屬釕配合物是最有前途的抗癌藥物之一，國際上普遍認(rèn)為釕和釕的配合物屬于低毒性，容易吸收并在體內(nèi)很快排泄。本文將著重介紹釕配合物與DNA結(jié)合

洛糖-6-磷酸異構(gòu)酶(AlsI)，和D-阿洛酮糖-6-磷酸3-差向異構(gòu)酶(AlsE)經(jīng)過順序酶反應(yīng)，經(jīng)由兩個(gè)中間產(chǎn)物D-阿洛糖6-磷酸和D-阿洛酮糖6-磷酸，實(shí)現(xiàn)將 D-阿洛糖轉(zhuǎn)化成 D-果糖-6-磷酸［7］。圖2 D-阿洛糖膜轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞內(nèi)代謝示意圖［8］Fig.2 Schematic illustration for the proposed membrane transport and intracellular metablolism of D-al

）固定化葡萄糖異構(gòu)酶的研究進(jìn)展金利群1，郭東京1，廖承軍2（1.浙江工業(yè)大學(xué)生物工程研究所，浙江杭州310014；2.浙江華康藥業(yè)股份有限公司，浙江衢州324302）高果糖漿作為一種天然甜味劑，被廣泛應(yīng)用于食品和飲料中。葡萄糖異構(gòu)酶是生產(chǎn)高果糖漿的關(guān)鍵酶之一，是重要的工業(yè)用酶，其固定化技術(shù)十分成熟，被認(rèn)為是固定化酶制劑的一個(gè)范本。主要介紹了葡萄糖異構(gòu)酶及其固定化方法以及葡萄糖異構(gòu)酶在高果糖漿生產(chǎn)中的應(yīng)用。葡萄糖異構(gòu)酶；固定化技術(shù)；高果糖漿前言高果糖漿（Hi

法。DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶是在DNA復(fù)制過程中必不可少的酶類，它同時(shí)也是一種核基質(zhì)蛋白，即核基質(zhì)結(jié)構(gòu)上的固有成分[3]。本實(shí)驗(yàn)研究了DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶Ⅱβ(DNA TopoisomeraseⅡβ，TopoⅡβ)在模擬失重后的表達(dá)量與分布位置的變化，進(jìn)而反映核基質(zhì)的改變。材料和方法1 材料 出生3 d SD大鼠乳鼠12只，雄性(第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心)，胎牛血清(四季青公司)，DMEM-F12/1：1培養(yǎng)基、雙抗(Hyclone公司)，胰酶(Millipore公司

014）葡萄糖異構(gòu)酶基因的篩選、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究廖承軍1，鄭微2，黃建峰2，劉成龍2，柳志強(qiáng)2，程新平1，毛寶軍1，陳德水1（1.浙江華康藥業(yè)有限公司，浙江 衢州 324302；2.浙江工業(yè)大學(xué)生物工程研究所，浙江 杭州 310014）通過基因挖掘的方法從NCBI數(shù)據(jù)庫中篩選得到一株嗜熱的葡萄糖異構(gòu)酶（GI）產(chǎn)生菌株Thermotoga petrophila RKU-1，化學(xué)合成該酶的基因并在大腸桿菌E.coli BL21（DE3）中進(jìn)行可溶性表達(dá)。重組

校蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶的生物學(xué)功能研究進(jìn)展*潘黎明、盛夢婷、黃子芮綜述， 李俊明審校蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶由多種細(xì)胞分泌，在生物學(xué)代謝過程中具有重要作用，其與糖尿病缺血性心臟病、腦缺血性疾病、血栓性疾病、阿爾茨海默病、白血病、腫瘤等多種疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制密切相關(guān)，現(xiàn)針對蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶的定義、功能及與相關(guān)疾病的關(guān)系做一論述。蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶；糖尿病缺血性心臟?。荒X缺血性疾?。谎ㄐ约膊。话柎暮Ｄ。荒[瘤近年來，醫(yī)學(xué)各方面技術(shù)不斷進(jìn)步，越來越多的疾病能被及早

出了DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶(topoisomerase，Topo)，可通過催化作用改變DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)［1］。研究發(fā)現(xiàn)，與正常細(xì)胞不同，拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶在腫瘤細(xì)胞中表現(xiàn)出不受其他因素影響的高水平表達(dá)。因此抑制DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶的活性就能阻止腫瘤細(xì)胞快速增殖，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡及壞死。近年來，以DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)各類抑制劑，用作抗癌藥物的研究已成為腫瘤化療的重要途徑。本文將對拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶的結(jié)構(gòu)、功能及以其為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物研究進(jìn)展進(jìn)行介紹。1 DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶的

分蘗洋蔥查爾酮異構(gòu)酶基因的克隆及表達(dá)載體的構(gòu)建劉丹 吳鳳芝（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，哈爾濱 150030）旨在得到分蘗洋蔥查爾酮異構(gòu)酶基因，探明該基因的功能?？寺〔闋柾?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶基因并構(gòu)建了其超表達(dá)和干擾載體，以期得到用于研究查爾酮異構(gòu)酶基因功能的表達(dá)載體。從分蘗洋蔥葉片中克隆得到查爾酮異構(gòu)酶基因cDNA 全長743 bp，GenBank登錄號為KJ489062。結(jié)果顯示，該基因633 bp的開放讀碼框編碼210個(gè)氨基酸的多肽序列。將PCR 擴(kuò)增克隆得到的分蘗洋

);DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶Ⅰ(Topgen);質(zhì)粒pBR322DNA(Takara);兔抗人抗體p-ATM、r-H2AX和Cleaved Parp等抗體購自Cell Signal Technology公司。3．化合物對腫瘤細(xì)胞的抑制率及IC50的測定:在96孔板上孔接種不同的腫瘤細(xì)胞，24h后采用不同濃度的化合物進(jìn)行增殖抑制實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞增殖48h后，用50%三氯乙酸 (TCA)固定，并用SRB(0．4%)稀醋酸溶液染色。室溫靜置10min，未與細(xì)胞結(jié)合的SRB用1

波處理對葡萄糖異構(gòu)酶性質(zhì)的影響胡國洲，張甫生，胡 鵬，陳光靜，武菁菁，闞建全*（西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶市農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評估實(shí)驗(yàn)室（重慶），重慶 400715）研究微波處理對葡萄糖異構(gòu)酶酶活性、穩(wěn)定性、動力學(xué)參數(shù)及構(gòu)象的影響。結(jié)果表明：不同微波處理時(shí)間和微波處理功率對葡萄糖異構(gòu)酶的活力都有著不同的影響。在7 0 ℃處理5 min條件下，當(dāng)微波功率為30 0、400 W時(shí)，葡萄糖異構(gòu)酶的相對酶活力分別增加14.

離交后。葡萄糖異構(gòu)酶的來源較多，商業(yè)化的酶主要來源于Bacillus和streptomyces[2]，可以催化葡萄糖、果糖，木糖、木酮糖之間的異構(gòu)反應(yīng)。由于對葡萄糖異構(gòu)酶的研究多集中在底物特異性及提高反應(yīng)穩(wěn)定性等方面，因而對副反應(yīng)產(chǎn)物的報(bào)道很少。此外果糖、葡萄糖易在堿性條件下，由于旋光改變作用發(fā)生分子重排和降解，通過烯二醇作為中間物可以實(shí)現(xiàn)果糖、葡萄糖和甘露糖之間的互相轉(zhuǎn)化[3-4]，此反應(yīng)又稱為Lobry de Bruyn-Alberda van Eke

)D-阿拉伯糖異構(gòu)酶(D-AI，EC5.3.1.3)，系統(tǒng)名稱為D-阿拉伯糖醛-酮糖異構(gòu)酶，催化D-阿拉伯糖(醛糖)異構(gòu)為D-核酮糖(酮糖)[1]。蒼白芽孢桿菌中的D-阿拉伯糖異構(gòu)酶，不僅可以催化D-阿拉伯糖轉(zhuǎn)化生成D-核酮糖，同時(shí)還可以催化D-半乳糖轉(zhuǎn)化生成D-塔格糖(tagatose)[2]。D-塔格糖是一種在自然界中存在但較為稀有的天然六碳酮糖，是果糖的一種差向異構(gòu)體[3]，相對分子質(zhì)量180.16，甜度為蔗糖的92%，甜味特性與蔗糖相似，而產(chǎn)生的熱

在L-阿拉伯糖異構(gòu)酶催化下進(jìn)行轉(zhuǎn)化[12]。L-阿拉伯糖異構(gòu)酶由araA 基因編碼，參與L-阿拉伯糖的代謝。由于D-半乳糖和L-阿拉伯糖在三維結(jié)構(gòu)上相似，見圖1，因此L-阿拉伯糖異構(gòu)酶還能催化D-半乳糖生成D-塔格糖[13]。該酶在用于生產(chǎn)D-塔格糖中具有很大商業(yè)價(jià)值[14]。圖1 L-阿拉伯糖異構(gòu)酶催化的反應(yīng)Fig.1 In vivo and in vitro reactions catalyzed by AI本文采用DNA 重組技術(shù)構(gòu)建了一株高表達(dá)L-

葡萄糖6-磷酸異構(gòu)酶(glucose-6-phosphate isomerase，GPI)抗原及抗GPI抗體與RA相關(guān)后，許多學(xué)者開始對這兩種指標(biāo)在RA中的診斷價(jià)值進(jìn)行研究，然而結(jié)果不甚一致。本研究應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法對北京協(xié)和醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診就診的126例RA患者和122例均存在不同程度的外周關(guān)節(jié)痛或關(guān)節(jié)炎的非RA患者的血清標(biāo)本進(jìn)行了GPI、RF和抗CCP2抗體檢測，探討GPI單獨(dú)及聯(lián)合檢測對RA的診斷價(jià)值。對象和方法對象及分組RA組：126例RA患者，

的兩種Ⅱ型拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶。就原核生物來說，Ⅱ型拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶能夠通過引入負(fù)超螺旋來實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié) DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的功能[1]。除古菌拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶Ⅳ以外，Ⅱ型拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶的其他類型都屬于ⅡA型的拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶的范疇，具有一級結(jié)構(gòu)和蛋白結(jié)構(gòu)上的同源性，然而作用卻各異。topoisomeraseⅣ(拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶Ⅳ)與DNA gyrase(DNA解旋酶)是細(xì)菌基因組一般編碼的ⅡA型拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶的兩種類型。喹諾酮類藥物主要靶向細(xì)菌的兩種Ⅱ型拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶，借助于對酶催化反應(yīng)的干擾來達(dá)到殺菌的目的

用固定化葡萄糖異構(gòu)酶進(jìn)行異構(gòu)化反應(yīng)，得到果糖和葡萄糖的混合液即果葡糖漿，再經(jīng)脫色，樹脂處理，蒸發(fā)濃縮，得到42%的果葡糖漿[3]。為了方便儲運(yùn)及較高的穩(wěn)定性，固定化葡萄糖異構(gòu)酶的商品形態(tài)為干燥的顆粒，其中只含極少量的水，因此酶顆粒使用前需進(jìn)行活化（水化）?；罨^程就是用底物（葡萄糖漿）來使酶顆粒吸收水分，從而使酶發(fā)揮其催化功效[4]。關(guān)于葡萄糖異構(gòu)酶的固定化方法、穩(wěn)定性和葡萄糖異構(gòu)化的研究很多，但是關(guān)于固定化葡萄糖異構(gòu)酶活化的研究卻尚未見報(bào)道[5-7]。本

在細(xì)菌Ⅱ型拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶上發(fā)生作用，然而殺菌的途徑或許會由于修飾基團(tuán)各異。筆者分析了喹諾酮類的藥物所具有的深層次的作用機(jī)制，得出喹諾酮類的藥物存在特征各異兩個(gè)作用階段。這或許是各喹諾酮類的藥物有著不同的殺菌效果的藥動學(xué)方面的原因。1 喹諾酮類藥物主要的靶點(diǎn)細(xì)菌的兩種Ⅱ型拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶是喹諾酮類藥物主要的靶點(diǎn)。對原核生物而言，Ⅱ型拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶借助于負(fù)超螺旋的引入使調(diào)節(jié)DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的功能得以實(shí)現(xiàn)［1］。除古菌的拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶Ⅳ，別的Ⅱ型拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶均為ⅡA型拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶，存在

)固定化葡萄糖異構(gòu)酶活化條件對其酶活的影響胡 弢，周雪艷，趙國群(河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北石家莊 050018)固定化葡萄糖異構(gòu)酶在使用前需先進(jìn)行活化，從而使酶發(fā)揮其最佳催化功效。本文從糖液濃度、溫度、pH、活化時(shí)間和金屬離子五個(gè)方面研究了活化條件對GENSWEETTMIGI－SA固定化葡萄糖異構(gòu)酶酶活的影響。該酶的最適活化條件為:葡萄糖液濃度60%、溫度55℃、pH 7.5、時(shí)間4h。經(jīng)此條件活化之后，其酶活達(dá)815U/g，與常規(guī)活化條件相比

楚。DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶（topoisomerase）參與DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、重組及修復(fù)等所有關(guān)鍵的細(xì)胞核內(nèi)過程，是抗腫瘤研究的熱點(diǎn)。本研究擬探討維康醇對DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶活性的影響。1 材料與方法1.1 材料pBR322 DNA（產(chǎn)品號：D3050）、DNA 拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶 Ⅰ（TopoⅠ）（產(chǎn)品號：D2240A）、ATP、（產(chǎn)品號：D4041）購自TaKaRa公司；DNA拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶Ⅱα（TopoⅡα）（產(chǎn)品號：T8944-100UN） 購自 Sigma公司；10-

朱海梅 羅 勇 趙 明*(1.首都醫(yī)科大學(xué)化學(xué)生物學(xué)與藥學(xué)院多肽及小分子藥物北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100069;2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬安貞醫(yī)院泌尿科，北京 100029)1 IntroductionThe action mechanism of drugs has been an interesting issue of people worked in pharmacy，chemistry，biology and medicine.Exploring t

核糖-5-磷酸異構(gòu)酶也叫D-核糖-5-磷酸乙酮醇異構(gòu)酶，是自然界中廣泛存在的一種高度保守的蛋白酶，參與原核和真核生物的糖代謝(如磷酸戊糖途徑)，同時(shí)在植物二氧化碳固定的卡爾文循環(huán)中，它是催化5-磷酸核糖和5-磷酸核酮糖相互轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵酶［2-3］。這些代謝參與還原型輔酶Ⅱ(NADPH)的合成以及戊糖的氧化、非氧化合成［4］。有研究［5］表明，人類缺乏核糖-5-磷酸異構(gòu)酶會引起髓鞘的損傷，從而導(dǎo)致諸如白質(zhì)腦病以及包括周圍神經(jīng)病變等在內(nèi)的神經(jīng)元異常。核糖-5-磷

拓?fù)?span id="j5i0abt0b" class="hl">異構(gòu)酶 II（Topo II）抑制劑是一類重要的抗腫瘤藥物。目前臨床上使用的 Topo II 抑制劑存在著毒副作用大、易產(chǎn)生耐藥性的缺點(diǎn)，而新型 Topo II 抑制劑的研發(fā)因化合物結(jié)構(gòu)類型的局限進(jìn)展緩慢。極端環(huán)境中的微生物因其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和生理機(jī)能，能夠產(chǎn)生多種極端酶和生物活性物質(zhì)，成為近年來受到廣泛關(guān)注的抗腫瘤藥物的重要資源。中國科學(xué)院上海藥物研究所耿美玉課題組和中國海洋大學(xué)顧謙群課題組對從火山口沉積物來源的桔青霉 penicillium citri

10009木糖異構(gòu)酶 (Xylose isomerase，Ⅺ) (EC 5.3.1.5)可以催化五碳糖D-木糖轉(zhuǎn)化為D-木酮糖，在微生物體內(nèi)的糖代謝過程中起著重要的作用；在體外亦能催化D-葡萄糖到D-果糖的異構(gòu)化反應(yīng)，所以又稱為葡萄糖異構(gòu)酶 (圖 1)。木糖異構(gòu)酶具有極其重要的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值，和蛋白酶、淀粉酶等并稱為重要的工業(yè)用酶[1]，引起研究人員的關(guān)注并對其開展了較為廣泛的研究。在基礎(chǔ)研究方面，發(fā)現(xiàn)該酶的結(jié)構(gòu)非常穩(wěn)定，是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系優(yōu)良模型之

張波,殷燕木糖異構(gòu)酶 (xyloseisomerase,XI,EC 5.31.1.5),又稱葡萄糖異構(gòu)酶,此酶在細(xì)胞內(nèi)可將五碳糖D-木糖轉(zhuǎn)化為D-木酮糖,在微生物體內(nèi)的糖代謝過程中起著重要的作用。在體外可轉(zhuǎn)化葡萄糖形成果糖,并已經(jīng)用于高果糖漿的工業(yè)生產(chǎn),是一種重要的工業(yè)用酶。目前用于生產(chǎn)的木糖異構(gòu)酶多來自Streptom yces,Actinoplanes,Flavobacterium等常溫菌,其催化產(chǎn)物需要借助層析等濃縮步驟方可得到 55%的高果糖漿[1

酸乳桿菌亞油酸異構(gòu)酶的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制分析陳士華1吳興泉1張 慧1曹 健2(河南工業(yè)大學(xué)1，鄭州 450001)(中原工學(xué)院2，鄭州 450007)對嗜酸乳桿菌亞油酸異構(gòu)酶基因的啟動子區(qū)進(jìn)行了定位，證明該基因?yàn)閱雾樂醋咏Y(jié)構(gòu)。分析該酶的代謝途徑證明亞油酸異構(gòu)酶單獨(dú)處于一條分支途徑，無其他的酶與之協(xié)同作用。分析四種乳酸菌亞油酸異構(gòu)酶基因的上游調(diào)控區(qū)，發(fā)現(xiàn)了12個(gè)保守位點(diǎn)，可能在亞油酸誘導(dǎo)基因表達(dá)調(diào)控中起重要作用。確定該蛋白N端無信號肽存在，但在N端25(27)

動放線菌葡萄糖異構(gòu)酶基因xylA的克隆及其表達(dá)條件的優(yōu)化王 賀1,2，楊瑞金2,*，華 霄2，錢婷婷1，張文斌2，蔣孝燕2(1.江南大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無錫 214122；2.江南大學(xué)食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122)為克隆、表達(dá)密蘇里游動放線菌葡萄糖異構(gòu)酶(GI)基因xylA，并對其誘導(dǎo)表達(dá)條件進(jìn)行初步優(yōu)化。采用Slowdown PCR方法克隆得到密蘇里游動放線菌(Actinoplanes missouriensis)CICIM

細(xì)胞中的亞油酸異構(gòu)酶 (linolenic acid isomerase,LAI)可催化亞油酸轉(zhuǎn)化為共軛亞油酸的反應(yīng)，并且反應(yīng)產(chǎn)物均為活性共軛亞油酸異構(gòu)體。亞油酸異構(gòu)酶最早發(fā)現(xiàn)于溶纖維丁酸弧菌（Butyrivibrio fibrisolvens）中，之后，又發(fā)現(xiàn)痤瘡丙酸桿菌（Propionibacterium acnes）、棒桿菌（Cornebacterium ssp）等能產(chǎn)生亞油酸異構(gòu)酶。目前，有些菌種的亞油酸異構(gòu)酶已被分離純化。然而，這些菌種有些是厭氧

侶亞基能夠增強(qiáng)異構(gòu)酶的活性，兩者功能的聯(lián)合產(chǎn)生了高效的蛋白質(zhì)折疊輔助作用。相關(guān)研究成果發(fā)表在近期的《美國國家科學(xué)院院刊》上。氨基酸鏈必須折疊成特定的空間結(jié)構(gòu)，蛋白質(zhì)才具有生物學(xué)功能。當(dāng)一種蛋白質(zhì)沒有正確地折疊時(shí)，會導(dǎo)致很多種疾病，例如鐮刀型細(xì)胞貧血癥、瘋牛病和老年癡呆癥等。因此，蛋白質(zhì)折疊問題也是生命科學(xué)領(lǐng)域的前沿課題之一，與人類健康密切相關(guān)。近年來的研究表明，特定的異構(gòu)酶有促進(jìn)蛋白質(zhì)折疊的功能。其原因在于連接氨基酸的肽鍵有順式和反式兩種異構(gòu)體，順式肽鍵允