荊芥中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留測定方法的建立及殘留狀況調(diào)查

周國威 賈月梅 趙亞文 李海鷹

摘要：目的研究中藥材荊芥中有機(jī)磷類農(nóng)藥的殘留情況，為荊芥的綠色種植和監(jiān)管提供參考依據(jù)。方法通過建立氣相色譜-火焰光度檢測器（GC-FPD）同時分析測定9種有機(jī)磷類農(nóng)藥的方法，并用于20批次荊芥中農(nóng)藥殘留狀況研究，然后對檢測結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果在檢測的20批次樣品中，有4批樣品檢出了3種有機(jī)磷類農(nóng)藥，分別是氧化樂果、久效磷和對硫磷，其中有2批樣品檢測出對硫磷殘留，檢出濃度分別為0.083 mg/kg和0.090 mg/kg，氧化樂果和久效磷殘留的檢出濃度分別為0.065 mg/kg和0.068 mg/kg。結(jié)論建立的方法操作簡便、快速和準(zhǔn)確，可用于荊芥中9種有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留的測定，所測荊芥雖不同程度受到有機(jī)磷類農(nóng)藥污染，但未超過歐洲藥典（EP9.0）中的最大農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：荊芥;有機(jī)磷;農(nóng)藥殘留;GC-FPD

中圖分類號：R282? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? 文章編號：1007-2349（2022）06-0062-04

荊芥，始記于《神農(nóng)本草經(jīng)》，常作為解表藥，應(yīng)用于中醫(yī)臨床治療中，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，它有解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒和抗腫瘤作用[1-3]，用途十分廣泛。隨著野生中藥資源的匱乏，人工種植逐漸成為中藥材的主要來源[4]，與傳統(tǒng)農(nóng)作物相似，規(guī)模化種植過程中，會使用農(nóng)藥防治病蟲害，因此可能導(dǎo)致中藥材中存在農(nóng)藥殘留。

有機(jī)磷類農(nóng)藥作為一種廣譜的殺蟲劑，因其具有廉價、高效等優(yōu)點，有不少種類被廣泛應(yīng)用[5]，但因其急性毒性強(qiáng)，在環(huán)境和作物中的農(nóng)藥殘留可通過食物富集作用而影響人類健康[6]，因此，為加強(qiáng)對中藥材中此類農(nóng)藥殘留的監(jiān)控力度，建立快速、有效、靈敏度高和多殘留同時檢測的農(nóng)藥殘留檢測方法已經(jīng)成為評控中藥材中農(nóng)藥殘留量的重要任務(wù)。

本研究建立了快速、有效、低成本的氣相色譜-火焰光度檢測器（GC-FPD）法，可同時測定荊芥中9種有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留量，并調(diào)查分析荊芥中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留狀況，為荊芥的綠色規(guī)范種植和監(jiān)管提供農(nóng)藥殘留監(jiān)控依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 GC-2010plus 型氣相色譜分析儀（帶火焰光度檢測器）和AOC-20i 型自動進(jìn)樣器（日本SHIMADZU公司）;2-6型離心機(jī)（德國Sigma公司）;AG204型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 試藥 乙腈（批號：20181202001，純度：色譜純），天津賽孚瑞科技有限公司;正己烷（批號：20180715001，純度：色譜純），天津賽孚瑞科技有限公司;甲苯（批號：2018032101，純度：色譜純），上海安譜實驗科技股份有限公司;敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)品（批號：20181222）、甲胺磷標(biāo)準(zhǔn)品（批號：20180906）、滅線磷標(biāo)準(zhǔn)品（批號：20181011）、甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)品（批號：20181011）、氧化樂果標(biāo)準(zhǔn)品（批號：20180906）、久效磷標(biāo)準(zhǔn)品（批號：20180906）、樂果標(biāo)準(zhǔn)品（批號：20180906）、毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品（批號：20181210）、對硫磷標(biāo)準(zhǔn)品（批號：20180906），以上9種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格均為：100 μg/mL，購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所。

1.3 試樣 荊芥樣品信息及其對應(yīng)序號，見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 混合標(biāo)準(zhǔn)品儲備液制備 精密量取各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻，得1 μg/mL的9種有機(jī)磷農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于0～4 ℃下，避光保存。

2.1.2 供試品溶液制備 將荊芥樣品粉碎，過3號??? 篩，精密稱定1.0 g樣品，置于20 mL離心管中，加入乙腈5 mL，渦旋提取5 min，4000 r/min離心10 min，將上層清液轉(zhuǎn)入雞心瓶中，再用乙腈5 mL提取一次，合并提取液，減壓濃縮至2 mL，待凈化。

固定好石墨化碳/氨基固相萃取柱，加約1 cm高無水硫酸鈉，用乙腈∶甲苯（3∶1）溶劑3 mL預(yù)淋洗，當(dāng)柱內(nèi)液面即將到達(dá)硫酸鈉頂部時，將上述濃縮液倒入柱中，用2 mL乙腈：甲苯（3∶1）洗脫液洗滌三次后，再用10 mL乙腈：甲苯（3∶1）洗脫2次，用雞心瓶收集流出液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上40 ℃濃縮至干，加1 mL正己烷溶解，即得。

2.2 色譜條件 毛細(xì)管色譜柱：DB-1701（30 m×0.32 mm，0.25 μm）;進(jìn)樣口溫度：250 ℃;檢測器溫度：250 ℃;程序升溫：初始柱溫50 ℃，以30 ℃/min升至130 ℃，以8 ℃/min升至220 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升至250 ℃，保持3 min;載氣為氫氣（純度≥99.999 %），其流量：65 mL/min;空氣流量：90 mL/min;進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣;進(jìn)樣量：1 μL。該條件下9種農(nóng)藥分離良好，其混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的GC-FPD色譜圖見圖1。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密量取“2.1”項下儲備液適量，用正己烷為溶劑，配制9種有機(jī)磷類農(nóng)藥濃度依次為0.05，0.1，0.2，0.5和1 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進(jìn)行GC-FPD測定，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸計算，結(jié)果見表2。

2.3.2 精密度試驗 精密量取“2.1”項下農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，配制濃度為0.5 μg/mL的9種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，根據(jù)峰面積，計算各農(nóng)藥的精密度值，結(jié)果表明：各目標(biāo)農(nóng)藥峰面積的RSD值為1.10 %～3.76%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 加樣回收率試驗 準(zhǔn)確稱取空白荊芥樣品1.0 g，精密加入農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品適量，使其分別成0.2、0.5和1 mg·kg-1低、中、高3個濃度水平樣品，每個水平下分別制備3份供試品溶液，進(jìn)行GC-FPD測定，結(jié)果見表3。

2.4 荊芥樣品測定 按“2.1.2”項下方法制備，在“2.2”項所述色譜條件下，對20批荊芥進(jìn)行GC-FPD測定，根據(jù)峰面積，計算其中的農(nóng)藥殘留量，并對測出農(nóng)藥殘留的樣品，用氣相色譜-質(zhì)譜法聯(lián)用儀（GC-MS）法進(jìn)行驗證，結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 方法適應(yīng)性情況 在方法建立過程中，采用在中藥材農(nóng)藥殘留檢測中常用的乙腈作為提取溶劑，并以溶劑消耗少、回收率高的渦旋提取、離心分離作為提取方式[7-9]。未凈化的荊芥基質(zhì)成分比較復(fù)雜，故采用農(nóng)藥殘留檢測中操作簡單、重現(xiàn)性好的固相萃取技術(shù)[10，11]，以石墨化碳/氨基固相萃取柱對荊芥樣品進(jìn)行凈化，結(jié)果顯示，9種有機(jī)磷類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2在0.9984～0.9999之間，說明9種有機(jī)磷類農(nóng)藥在0.05～1 μg/mL之間線性關(guān)系良好;三個添加水平的平均回收率在75.8 %～114.5 %之間，RSD在1.76 %～5.43 %之間，表明該方法準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，適合荊芥中9種有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留的測定。

3.2 荊芥樣品中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留情況 為保證檢測的結(jié)果具有指導(dǎo)意義，荊芥樣品采自市場流通最大的河北安國市及其周邊地區(qū)[12]，經(jīng)過實地調(diào)研，選取荊芥中最后可能存在的9種農(nóng)藥作為檢測目標(biāo)，檢測結(jié)果顯示，20批荊芥樣品中，有4批檢出了有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留，其中樣品中檢測出的2批對硫磷殘留的濃度分別為0.083 mg/kg和0.090 mg/kg，檢出的氧化樂果和久效磷殘留濃度分別為0.065 mg/kg和0.068 mg/kg。

現(xiàn)在，我國還沒有關(guān)于此3種有機(jī)磷類農(nóng)藥在中藥材中的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，參照最新版歐洲藥典（EP 9.0）中的標(biāo)準(zhǔn)，氧化樂果（以氧化樂果和樂果的總和為計）、對硫磷和久效磷的限量標(biāo)準(zhǔn)分別為0.1 mg/kg，0.5 mg/kg和0.1 mg/kg，由此可見，荊芥樣品中這三種農(nóng)藥殘留量符合歐洲藥典（EP 9.0）中的限量要求。

本研究建立的GC-FPD法操作簡便、快速和準(zhǔn)確，可用于荊芥中9種有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留的測定;所測荊芥樣品總檢出率（4/20）不高，檢出的有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留符合歐洲藥典（EP 9.0）中對中藥材中農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn);但是與歐洲藥典相比，我國的藥典對中藥材農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)不夠完善，因此，還需國家相關(guān)部門制定合適的標(biāo)準(zhǔn)，為荊芥的規(guī)范化種植進(jìn)行有效的監(jiān)控和管理，以保障荊芥食用和藥用安全。

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（收稿日期：2021-09-06）