工程菌
- 利用大腸桿菌工程菌低成本發(fā)現(xiàn)抗分枝桿菌藥物
一種在大腸桿菌工程菌中檢測結核分枝桿菌藥物靶標的合成生物學框架。研究構建了目標必需替代大腸桿菌（TESEC），將其中一種必需代謝酶刪除，并使用功能相似的Mtb衍生物取代，將細菌生長與目標酶的活性聯(lián)系起來。對結核分枝桿菌丙氨酸外消旋酶（Alr）的TESEC 模型進行高通量篩選，結果顯示苯那普利是一種靶向抑制劑，且這一結果在全細胞Mtb篩選中得到了驗證；體外生化分析表明，它與臨床Alr抑制劑不同，其機制是非競爭性的。研究通過對TESEC菌株進行4個額外靶點的表
廣東藥科大學學報 2023年1期2023-04-16
- 智能工程菌
——診治炎癥性腸病新希望
開發(fā)了一株智能工程菌——i-ROBOT，可實現(xiàn)在無創(chuàng)情況下實時監(jiān)測和記錄炎癥性腸病的發(fā)生與發(fā)展，并以自調控的給藥模式緩解病癥。葉邦策團隊開發(fā)的i-ROBOT 是使用大腸桿菌Nissle1917 作為底盤細胞進行改造的，能夠感知低濃度的炎癥標志物，具有診斷早期腸炎的潛力。同時，i-ROBOT 還能記錄疾病發(fā)生與發(fā)展的信息，幫助監(jiān)測胃腸道健康狀態(tài)。據(jù)《科技日報》記者采訪，葉邦策介紹，他們會提前3 天將智能工程菌通過口服灌胃的方式送入小鼠體內，等給藥結束后，通過
人人健康 2023年4期2023-04-05
- 表達木質素降解酶的基因工程產朊假絲酵母菌部分生物學特性研究
.0。1.2 工程菌木質素降解酶基因拷貝數(shù)測定dPCR技術是將指數(shù)信號轉為數(shù)字信號的一種新的核酸定量方法（Vogelstein等，1999）。將總模板PCR反應體系分液，分許多單獨的PCR反應進行擴增，檢測有無熒光信號來計算拷貝數(shù)。后經泊松統(tǒng)計學處理，最后得出樣品DNA/RNA的濃度（Pinheiro等，2012；Sanders等，2011；Hindson等，2011）。相比qPCR技術，該技術無需建立標準曲線，直接定量核酸拷貝數(shù)，對低濃度的樣品定量更準確
中國飼料 2023年1期2023-01-07
- 羅非魚無乳鏈球菌SIP-pET32a基因工程菌高密度發(fā)酵工藝及SIP蛋白提取方法研究
亞單位疫苗基因工程菌的基礎上，針對中試生產環(huán)節(jié)，進一步開展基因工程菌高密度發(fā)酵及目標蛋白提取條件的研究，從發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選、誘導劑的使用劑量、誘導時間，以及目標蛋白提取與純化等方面優(yōu)化工藝條件，以實現(xiàn)基因工程菌高密度培養(yǎng)和獲得較高目標產物濃度的目的，進一步節(jié)約疫苗生產成本并提高產出效率，解決規(guī)?；a決定性環(huán)節(jié)的問題，為基因工程疫苗走向產業(yè)化奠定基礎。無乳鏈球菌是革蘭氏陽性菌，可感染包括羅非魚在內的多種淡水養(yǎng)殖魚類。2009年至今，我國羅非魚養(yǎng)殖業(yè)受到無乳
中國水產 2022年11期2022-12-12
- 過表達海藻糖合成酶編碼基因TvTPS/TPP的綠色木霉工程菌的構建及其抗逆特性分析
PP的綠色木霉工程菌株，以研究TvTPS/TPP在海藻糖合成以及抗逆促生等方面的功能。1 材料與方法1．1 供試菌株綠色木霉（Trichoderma viride）Tv-1511，由本實驗室分離保存，在中國普通微生物菌種保藏中心的保藏號為CGMCC No．16800，保藏日期為2018年12月4日，保藏于中國科學院微生物研究所。1．2 培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基和PDB培養(yǎng)基等購自于青島海博生物技術有限公司。PDB培養(yǎng)基（g/L）：馬鈴薯浸粉6．0 g
山東農業(yè)科學 2022年5期2022-06-13
- 綠色木霉Tv-1511組蛋白乙酰化酶編碼基因TvGCN5的功能分析
CN5基因缺失工程菌構建 （1）敲除片段構建：以綠色木霉Tv-1511基因組DNA為模板，擴增TvGCN5基因的上游片段和下游片段，敲除片段擴增引物分別為：上游片段擴增引物TvGCN5-up-F：ACAGTGGGATTTGGAAGTTGGGAT和TvGCN5-up-R：GCCATATTGATGTAAGGTAGCTCAGGTGGAATTAGGTGAGGTAGAGAC；下游片段擴增引物TvGCN5-down-F：GGGTATTCCATCTAAGCCATAGTA
生物技術通報 2022年5期2022-06-10
- 冬小麥擴展蛋白TaEXPA8黑曲霉工程菌的構建及纖維素水解作用分析
XPA8黑曲霉工程菌的發(fā)酵上清液進行SDS-PAGE試驗以檢測TaEXPA8蛋白的表達情況，操作方法詳見試劑盒說明書。1.7 TaEXPA8工程菌的纖維素水解作用分析采用濾紙崩解試驗檢測TaEXPA8工程菌的纖維素水解作用，在纖維素酶液中分別添加等體積的TaEXPA8工程菌、野生型黑曲霉菌株的發(fā)酵上清液，以培養(yǎng)基為空白對照。取10 mL上述液體分別添加到鋪有50 mg無淀粉濾紙的培養(yǎng)皿中，25 ℃，2 d后取出濾紙于顯微鏡下觀察，同時采用3,5-二硝基水楊
食品與發(fā)酵工業(yè) 2022年2期2022-02-22
- 改變中心碳代謝途徑對發(fā)酵生產L-亮氨酸的影響
2.1 質粒與工程菌構建方法PCR擴增引物通過諾唯贊CE Design引物軟件設計，由金唯智公司合成，引物序列見表2．常規(guī)的分子克隆方法如PCR、DNA限制性內切按照標準程序進行[30]．C. glutamicum的基因改造方法參考文獻[5]．來源于青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)的高活性突變體PKT，其編碼基因為fxpk，GenBank：MN081868.1，由金唯智公司合成．敲除及基因整合質粒通過重疊PCR獲得基
天津科技大學學報 2021年6期2021-12-22
- 重組白細胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白工程菌的高密度發(fā)酵
。根據(jù)TNHH工程菌的生長特性，結合包涵體產量，優(yōu)化培養(yǎng)基組成及補料流加方式，以減少碳源的抑制[8-9]，控制合適的比生長速率，選擇在適宜的密度誘導表達，實現(xiàn)TNHH工程菌的高密度高表達。鑒于誘導劑異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)毒性較大、成本較高，而乳糖作為二糖，無毒、價廉，本身可以作為碳源使用，是一種較佳的IPTG替代物，目前已有不少基因工程菌利用乳糖進行誘導的報道[10-11]，筆者對此進行了對比研究。隨著國家藥品監(jiān)督管理局對制藥行業(yè)抗生素使
生物加工過程 2021年3期2021-07-05
- 利用CRISPRi 技術構建乙醛酸生物合成Corynebacterium glutamicum工 程菌
。1.3.4 工程菌的篩選及鑒定C. glutamicum工程菌利用蔗糖致死基因sacB反向篩選技術，通過2 次同源重組方法進行基因敲除，其原理如圖2所示。圖2 同源重組原理示意圖Fig. 2 Schematic diagram of the homologous recombination principle以突變菌株C. glutamicum/dCas9Δaldh為例，其構建及篩選過程如下：將打靶質粒dCas9-pK18mobsacB利用電轉化轉入到野
食品科學 2021年2期2021-01-20
- 代謝工程改造大腸桿菌生產衣康酸
化），所構建的工程菌在搖瓶發(fā)酵中的產量達到0.69 g/L［7］。Harder等［8］通過在已構建的衣康酸生產菌株中引入溫敏性啟動子lambda控制IDH基因的表達，使菌株可在37℃下生長而在28℃下產酸，從而顯著提高了菌株生產衣康酸的能力。因此，利用大腸桿菌生產衣康酸是未來生產衣康酸的趨勢，具有廣闊的市場前景［9］。在已報道的大腸桿菌生產衣康酸研究中，主要存在2個制約衣康酸產量提升的問題：一是發(fā)酵副產物乙酸的含量較高［10］；二是細胞代謝過程與發(fā)酵過程的
重慶理工大學學報(自然科學) 2020年11期2020-12-24
- 木聚糖酶xynZF318在枯草芽孢桿菌WB600中的表達及發(fā)酵條件優(yōu)化
構建產木聚糖酶工程菌有望使木聚糖酶在工業(yè)生產中有更廣泛的應用。在構建木聚糖酶工程菌的研究中,大多以大腸桿菌和畢赤酵母為宿主菌,但大腸桿菌和畢赤酵母的次級代謝產物均不能用于食品工業(yè)[10]?？莶菅挎邨U菌具有生長速度較快,對營養(yǎng)要求較低,對農作物安全,人畜無害,對環(huán)境友好等優(yōu)點,屬于食品級安全微生物[11-12],并且枯草芽孢桿菌有完善的分泌系統(tǒng),可以分泌胞外酶。由于枯草芽孢桿菌的多種優(yōu)點,近些年,很多研究者將其作為模式生物運用到生物研究中[13-15]。向亞
食品工業(yè)科技 2020年22期2020-11-18
- 釀酒酵母工程菌產青蒿酸的發(fā)酵動力學研究
visiae）工程菌，并通過系列優(yōu)化，不斷提高青蒿酸發(fā)酵產量。王冬等[15]研究發(fā)現(xiàn)，青蒿酸的發(fā)酵制備存在成本偏高的問題。目前，國內的研究主要集中在通過對菌種的基因工程改造，實現(xiàn)青蒿酸前體-紫橞槐二烯的微生物合成，但尚未實現(xiàn)青蒿酸的體內合成[16-17]。于文文等[18]在搖瓶發(fā)酵的基礎上，通過響應面優(yōu)化確定了S.cerevisiae工程菌1211產青蒿酸較為適宜的發(fā)酵工藝并提高了青蒿酸的產量。本研究首先在50 L發(fā)酵罐中對S.cerevisiae工程菌1
中國釀造 2020年4期2020-05-15
- Adk1過表達和檸檬酸鈉補料促進酵母S-腺苷甲硫氨酸的合成
1，結果發(fā)現(xiàn)，工程菌胞內AMP、ADP和ATP的水平均得到顯著改善。關于利用微生物細胞內ATP代謝調控來直接生產ATP或將ATP利用到一些藥用化學物分子的生物合成研究也已成為熱點問題。這些研究大多集中在基于腺嘌呤補救途徑相關基因的調控來提高ATP的供給最終實現(xiàn)目的產物積累量的提高。釀酒酵母腺苷酸激酶ADK1，由Adk1基因編碼，主要負責催化AMP生成ATP。本研究以課題組前期通過紫外誘變育種技術并結合乙硫基抗性篩選得到一株高產SAM的突變菌株Sacchar
中國農業(yè)科技導報 2020年10期2020-03-13
- 低產尿素黃酒酵母工程菌的釀造特性
R1,2的酵母工程菌N85DUR1,2-c。黃酒發(fā)酵實驗表明，與出發(fā)菌株相比，工程菌N85DUR1,2-c所釀黃酒發(fā)酵液中尿素和EC的含量分別降低了89.1%和55.3%，且理化指標無明顯差異[12]。本文研究了黃酒發(fā)酵工藝參數(shù)對工程菌N85DUR1,2-c發(fā)酵液中尿素和EC含量的影響，并通過50 kL的生產試驗考察其發(fā)酵性能和降低黃酒中尿素和EC含量的能力，以期為工業(yè)化應用提供理論基礎。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 菌株釀酒酵母S.cerevis
食品與發(fā)酵工業(yè) 2020年3期2020-02-29
- 丙氨酸轉氨酶修飾對大腸桿菌L-色氨酸合成的影響
氨酸轉氨酶突變工程菌株，并探究各基因修飾后各工程菌在細胞生長、L-丙氨酸含量以及L-色氨酸產量等方面的差異。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 菌株和質粒 大腸桿菌E. coliFS-T0 由實驗室前期通過代謝工程手段及多輪化學誘變獲得的多類芳香族氨酸類似物抗性（5-甲基色氨酸、5-氟色氨酸和對氟苯丙氨酸抗性）的高產L-色氨酸工程菌株。本研究基因修飾所用質粒pKD46、pKD13 和pCP20由工業(yè)微生物教育部工程研究中心保藏，具體菌株見表1。表1 本實
生物技術通報 2020年1期2020-01-14
- 枯草芽孢桿菌生產β-丙氨酸的基因工程菌構建及其優(yōu)化研究
也高，運用構建工程菌的方式生產β-丙氨酸，能夠降低污染，降低成本，雖前期構建工程菌用時長，但工程菌構建成功后，后期只需投入細菌生長所需要的營養(yǎng)，憑借細菌生命周期短但繁殖速度快的特點，就能夠得到源源不斷的目的產物。根據(jù)工程菌種的不斷優(yōu)化應用，隨著產能的不斷提升，經濟效益也能進一步的提高?；?span id="j5i0abt0b" class="hl">工程菌生產氨基酸有較多的優(yōu)勢，比如目的性強，工作量小，局限性不多。具體應用時是利用DNA重組技術，對基因進行定向誘變，然后選擇和培育我們需要的基因工程菌。就目前來說，可以
生物化工 2020年5期2020-01-07
- 重組豬α干擾素工程菌的誘導表達及產物純化
：豬α干擾素;工程菌;誘導表達;包涵體;純化中圖分類號：S188 文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2019）09-0214-04干擾素（interferon，IFN）是動物細胞在受到某些病毒感染后，分泌的一種具有抗病毒功能的宿主特異性糖蛋白。通常根據(jù)產生干擾素的細胞不同將其分為Ⅰ、Ⅱ型干擾素，Ⅰ型干擾素主要包括α、β等6種，是由微生物、病毒等誘導產生，而Ⅱ型干擾素主要包括γ干擾素[1]。豬α干擾素是一種廣譜抗病毒藥，對豬的輪狀病毒腹瀉、流行性
江蘇農業(yè)科學 2019年9期2019-08-20
- CRISPR/Cas9介導的低產尿素黃酒酵母工程菌的構建
尿素含量的酵母工程菌，從而減少黃酒中EC的形成，提高黃酒的飲用安全性。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 菌株和質粒大腸桿菌(Escherichiacoli)JM109、pMGKR質粒(攜帶釀酒酵母PGK1的強啟動子PGK1p)由本實驗室保存。單倍體黃酒酵母S.cerevisiaeNa(MATa)和工程菌S.cerevisiaeNaDUR1,2-Δcar1(MATaura3car1::ura3 Φ(DUR1,2-URA3-PGK1p))由本實驗室分離和構
食品與發(fā)酵工業(yè) 2019年13期2019-07-24
- 牛乳腺炎無乳鏈球菌PI-2a菌毛島嶼AP1-AP2-BP基因亞單位抗體的制備
組原核BL21工程菌由內蒙古乳源性致病菌防控工程技術研究中心構建。1.2主要試劑 在該實驗中利用的主要試劑為NaCl、瓊脂、NaOH顆粒、卡那霉素、IPTG(異丙基-β-D-硫代半乳糖苷)、KCl、NaHPO4、甘油、KH2PO4、考馬斯亮藍R-250、Tris、濃HCl、SDS、過硫酸銨、Acrylamide、BIS、酵母浸粉、Glycine、胰蛋白胨、BPB、異丙醇、醋酸等，均購自哈爾濱博仕生物科技有限公司。1.3實驗動物 3只家兔，由山東中醫(yī)藥大學實
中國人獸共患病學報 2019年3期2019-04-11
- 河南華溪蟹金屬硫蛋白的GST融合表達及工程菌吸附重金屬的研究
1.5 轉MT工程菌對重金屬的生物吸附能力檢測將表達菌體與對照菌株（僅含空載體pGEX-6p-1）按1∶100接種至50 mL新鮮培養(yǎng)基（含50 mg/L Amp）中擴大培養(yǎng)，當菌液D600nm≥0.6時加入IPTG誘導蛋白表達，同時分別加入300 μmol/L的ZnSO4、CdCl2和 CuSO4溶液，37℃、200 r/min振蕩培養(yǎng)6 h，4℃、12 000 r/min離心10 min收集菌體，用新鮮的LB洗滌2次，80℃處理48 h后稱量菌體干重并
生物技術通訊 2018年5期2018-10-23
- 釀酒酵母合成番茄紅素的適配性優(yōu)化
啟動子釀酒酵母工程菌的培養(yǎng)。YPD培養(yǎng)基：酵母浸出粉10 g/L、蛋白胨20 g/L和葡萄糖20 g/L。固體培養(yǎng)基添加20 g/L的瓊脂粉。YPD培養(yǎng)基用于釀酒酵母的培養(yǎng)。畢宏生是第十二屆、十三屆全國人大代表，著名眼科專家，從事眼科臨床、教學及科研工作30多年，在白內障、視光及采用眼顯微外科手術解決復雜疑難性眼病、中西醫(yī)結合眼病的臨床及研究領域均取得突出成就。他還高度關注民生工程，注重承擔社會職責，連續(xù)多年為防盲治盲奔波勞力，多次協(xié)助政府推動重大公共衛(wèi)生
食品與發(fā)酵工業(yè) 2018年6期2018-07-18
- 葡萄糖激酶的克隆表達＊
激酶GK基因的工程菌，實現(xiàn)克隆表達，優(yōu)化表達條件，為與GpdPP偶聯(lián)的輔酶N A D P H再生體系貢獻新的酶源。1 材料與方法1.1 主要儀器與材料超凈工作臺、壓力蒸汽滅菌器、臺式高速冷凍離心機、恒溫培養(yǎng)振蕩器、PCR自動系列化分析儀、超聲波細胞破碎儀、電泳儀。Escherichia coli BL21(DE3)，pCDFDuet-1，HEPES、IPTG、4×Protein SDS PAGE Loading Buffer、Protein Marker、
海外文摘·藝術 2018年2期2018-07-07
- 生長分化因子(BMP11)重組質粒在工程菌株中的穩(wěn)定性研究
1)重組質粒在工程菌株中的穩(wěn)定性研究郝丹1,尤倩倩1,郝偉1,2,梁曉琳1,袁靖琳1,李全陽1,*(1. 廣西大學輕工與食品工程學院,廣西南寧 530004;2.憑祥出入境檢驗檢疫局,廣西憑祥 532600)為了研究重組質粒pET28a-BMP11在基因工程菌E.coliBL21(DE3)中的遺傳穩(wěn)定性,將重組菌E.coliBL21(DE3)/pET28a-BMP11液體轉接傳至100代,每隔20代取樣觀察菌落形態(tài),檢測菌體生長量、質粒保有率和目的蛋白表達
食品工業(yè)科技 2017年19期2017-10-19
- “一鍋雙酶”法制備L-天冬氨酸的工藝條件優(yōu)化
-天冬氨酸銨的工程菌，對其培養(yǎng)基、發(fā)酵條件以及制備條件進行優(yōu)化。得到的優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基:蛋白胨20 g/L，酵母浸粉5 g/L，NaCl 1.45 g/L，富馬酸10 g/L，NH4NO38 g/L，乳糖6 g/L，氨水調節(jié)pH至7.5。最佳發(fā)酵培養(yǎng)條件:發(fā)酵罐的轉速150 r/min，通氣量1.5 L/min，最佳的接種量0.5%(體積分數(shù))。通過發(fā)酵罐對優(yōu)化后的培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)，得出1 L發(fā)酵液可以轉化1 kg順丁烯二酸銨，優(yōu)化后相同培養(yǎng)體積的菌體轉化
生物加工過程 2017年4期2017-08-02
- 核桃JrLFY基因表達載體的構建及工程菌的篩選
細胞，成功獲得工程菌，為其基因缺失或過表達等試驗提供技術支持。關鍵詞：核桃；JrLFY基因；表達載體；工程菌中圖分類號：S664.1；Q78 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）08-1573-04DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.08.044Construction of Expression Vector and Selection of Engineering Strains from
湖北農業(yè)科學 2017年8期2017-05-26
- 優(yōu)化密碼子及誘導溫度提高雪白根霉脂肪酶在畢赤酵母中的表達
-opt的重組工程菌在搖瓶和50 L發(fā)酵罐中進行誘導表達。搖瓶培養(yǎng)條件下，含有rnl和rnl-opt重組工程菌的最大酶活分別為458 、956 U/mL。50 L發(fā)酵罐培養(yǎng)條件下，含有rnl和rnl-opt重組工程菌的最大酶活和總蛋白濃度分別為14 856 、30 500 U/mL和3.61、7.8 g/L。為了進一步提高含rnl-opt重組工程菌的表達酶活，對其在50 L發(fā)酵罐培養(yǎng)的誘導溫度進行優(yōu)化，當誘導溫度為22 ℃時，含rnl-opt重組工程菌的酶
食品與發(fā)酵工業(yè) 2017年1期2017-02-15
- 谷氨酸棒狀桿菌果糖代謝阻斷工程菌的構建
菌果糖代謝阻斷工程菌的構建許湄雪1，王北辰2，劉金雷1，范 榮1，陸 浩1，韓武洋1，李天明1,*，馮惠勇1（1.河北科技大學生物科學與工程學院，河北 石家莊 050018；2.威斯康星大學，威斯康星 麥迪遜 53706，美國）谷氨酸棒狀桿菌不僅可以利用葡萄糖和果糖作為碳源進行糖類代謝，也可以利用這些碳源作為底物生產葡萄糖酸、甘露醇及山梨醇等產品。為了提高底物利用率和目的產物的積累量，利用代謝工程阻斷糖類代謝的磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸轉移酶系統(tǒng)（phosp
食品科學 2016年21期2016-12-02
- 鉻還原酶ChrT工程菌的遺傳穩(wěn)定性研究*
還原酶ChrT工程菌的遺傳穩(wěn)定性研究*周思敏，唐嫻#，鄧鵬，董蘭嵐，何元，賈燕，白群華，肖虹△（重慶醫(yī)科大學公共衛(wèi)生與管理學院/醫(yī)學與社會發(fā)展研究中心/健康領域社會風險預測治理協(xié)同創(chuàng)新中心，重慶400016）目的研究重組鉻還原酶ChrT工程菌的遺傳穩(wěn)定性。方法將ChrT工程菌傳至50代，每10代進行遺傳穩(wěn)定性相關檢測。同時設置不加菌液的對照組作為空白對照組。結果各代ChrT工程菌的菌落生長形態(tài)、革蘭染色、生化反應結果與原代菌株一致；各代ChrT工程菌質粒穩(wěn)
現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生 2016年18期2016-11-10
- 生物反應器中表達ScFv大腸桿菌細胞自溶的分析
s，ScFv）工程菌和野生菌的外源蛋白表達及細胞活性的差異，發(fā)現(xiàn)外源蛋白高效表達并積累在細胞內，大部分活細胞較野生菌提前6 h進入活著但不可培養(yǎng) （Viable but nonculturable，VBNC）狀態(tài)，進而發(fā)生細胞自溶。分析工程菌與野生菌中脅迫應激和自溶途徑基因轉錄水平表達譜，發(fā)現(xiàn)外源蛋白表達過程中熱激途徑rpoH，dnaK，dnaJ，groEL，groES；酸脅迫途徑rpoS，gadE，gadX；氧脅迫途徑sodA，katE均出現(xiàn)表達波峰，而
食品與生物技術學報 2016年9期2016-11-10
- 密碼子優(yōu)化及透明顫菌血紅蛋白共表達提高耐熱脂肪酶在畢赤酵母的表達
l-opt重組工程菌的最大酶活力分別為7 U/mL和16 U/mL。50 L發(fā)酵罐培養(yǎng)條件下，含有tll和tll-opt重組工程菌的最大酶活力分別為201 U/mL和430 U/mL。為了進一步提高含tll-opt重組工程菌的表達酶活性，將vhb-opt轉入該重組工程菌得到工程菌VHb+（含有tll-opt和vhb-opt）。重組工程菌VHb+在搖瓶培養(yǎng)條件下最大酶活力為23 U/mL，分別是優(yōu)化后基因和原始基因最大表達酶活力的1.39 倍和3.28倍。重
食品科學 2016年19期2016-11-09
- 產順,順-粘康酸細胞工廠的構建與優(yōu)化
，已報道的主要工程菌株不僅需要誘導表達，遺傳不穩(wěn)定，而且發(fā)酵培養(yǎng)基組分復雜，不利于大規(guī)模工業(yè)化生產。構建能利用簡單無機鹽培養(yǎng)基、遺傳穩(wěn)定且不需要誘導表達的新型工程菌受到人們的關注。本研究在實驗室前期構建的產三脫氫莽草酸工程菌株WJ060中，整合合成順,順-粘康酸的3個外源基因(、、)，并且利用3個不同強度的組成型啟動子進行組合調控，成功構建了27株順,順-粘康酸工程菌，得到的最優(yōu)工程菌MA30的產量達到1.7 g/L。為了進一步提高順,順-粘康酸工程菌的生
生物工程學報 2016年9期2016-11-01
- 代謝工程改造谷氨酸棒桿菌生成丙酮酸
獲得了基因缺失工程菌株。利用4.5％的葡萄糖復合培養(yǎng)基，工程菌經搖瓶發(fā)酵48 h，丙酮酸的濃度達到14.6 g/L，而野生菌株僅為0.45 g/L；工程菌的糖酸轉化率為33.18％，比野生菌提高了32.5倍。丙酮酸；谷氨酸棒狀桿菌；丙酮酸醌氧化還原酶；丙酮酸脫氫酶；乳酸脫氫酶丙酮酸不僅是生物體內糖代謝途徑中重要的有機酸之一，而且也是合成多種化合物的前體，廣泛應用于食品、農藥、生化等工業(yè)中［1］。其中，丙酮酸作為酸味添加劑在食品工業(yè)中具有很大的發(fā)展?jié)摿?。丙?/div>
生物技術通報 2016年8期2016-09-14
- 纖維素酶基因克隆與表達研究進展
酶 基因克隆 工程菌 表達載體引言纖維素在人們賴以生存的地球上無處不在，是人們可以利用的可再生資源，但纖維素本身是不可以直接被人們利用的，要先把它降解為可被人利用的物質。目前，在降解纖維素的多種方法中，生物法還是較為有效的[1]，它是利用微生物代謝的產物纖維素酶來降解和轉化纖維素，但是在實際應用方面存在產酶活性較低、轉化率不高、設備耗材超出預算等問題，因此構建出產酶量多，產酶活性高的纖維素酶基因工程菌對纖維素資源的有效利用和社會生產具有重要意義。近年來，隨大陸橋視野·下 2016年6期2016-08-06
- 重組人β防御素 2工程菌的發(fā)酵及純化研究
人β防御素 2工程菌的發(fā)酵及純化研究張艷1,桑雪1,魏洪濤1*,張國利2(1. 吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 口腔科, 吉林 長春130033；2.軍事醫(yī)學科學院11所)摘要：目的發(fā)酵并純化重組人β-防御素2(HBD2)，為其生物活性的檢定奠定基礎。方法利用罐發(fā)酵人β-防御素2工程菌，并建立重組人β-防御素2的層析純化工藝。結果確定了工程菌優(yōu)化的最佳發(fā)酵條件為高溶氧、低溫誘導策略，獲得了高密度發(fā)酵工藝。建立了重組人β-防御素2的特殊純化工藝。結論完成了重組人β-防中國實驗診斷學 2016年3期2016-04-20
- 微生物發(fā)酵生產莽草酸及其樹脂分離性能的探討
桿菌等微生物為工程菌。本文就莽草酸的微生物發(fā)酵生產方法做簡單介紹，闡述了莽草酸樹脂分離性能等的研究，并對莽草酸未來發(fā)展應用做出展望。莽草酸 制備 微生物發(fā)酵 樹脂分離莽草酸（Shikimic Acid）又名毒八角酸，分子式為C7H10O5，白色晶體粉末。莽草酸及其衍生物在炎癥、腫瘤、心血管、禽流感等疾病治療中發(fā)揮重要的作用［1］，從上世紀80年代開始，人們已經開始對莽草酸及其衍生物的作用機理進行研究。隨著人們迫切地想研究出治療這些疾病的方法，莽草酸的需求量生物技術世界 2016年2期2016-04-11
- Bacillus methylotrophicus γ-聚谷氨酸合成酶基因的克隆表達
培養(yǎng)基中，重組工程菌都具有合成γ-PGA的能力，說明pgsBCA合成酶基因對于B.methylotrophicus SK19.001產γ-PGA是必需的。pgsBCA合成酶基因序列比對的結果的表明，pgsB和pgsC基因編碼的氨基酸序列相對保守。Bacillus methylotrophicus；非谷氨酸依賴型；γ-聚谷氨酸合成酶；克隆表達γ-聚谷氨酸（Poly-γ-Glutamate，γ-PGA）是一種多功能生物可降解高分子材料，相對分子質量一般在10食品與生物技術學報 2016年12期2016-03-07
- 虹鱒傳染性造血器官壞死病核酸疫苗工程菌發(fā)酵工藝研究
壞死病核酸疫苗工程菌發(fā)酵工藝研究趙景壯，徐黎明，劉淼，曹永生，劉紅柏，尹家勝，盧彤巖（中國水產科學研究院黑龍江水產研究所，黑龍江 哈爾濱 150070）急性傳染性造血器官壞死病（infectious hematopoietic necrosis，IHN）嚴重威脅虹鱒Oncorhynchus mykiss養(yǎng)殖業(yè)，造成嚴重的經濟損失，核酸疫苗已成為虹鱒IHN疾病預防的研究熱點。本研究首先檢測虹鱒IHN核酸疫苗工程菌的遺傳穩(wěn)定性，結果顯示工程菌在連續(xù)培養(yǎng)30代后水產學雜志 2016年6期2016-02-07
- 人工固定化生物活性炭的生理學研究
，篩選、馴化出工程菌，并通過固定化手段，形成工程菌的人工固定化生物活性炭.研究對工程菌人工固定化的生物活性炭和自然形成的生物活性炭對微污染水的凈化效率進行了試驗對比，并從生理學角度展開探討.1 人工固定化生物活性炭與自然形成的生物活性炭運行效果本實驗通過控制培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分分離培養(yǎng)出貧營養(yǎng)環(huán)境中高效分解有機物的微生物作為工程菌，然后將其固定在活性炭載體上，成為人工固定化生物活性炭系統(tǒng).同時在完全相同的條件下與其平行運行的是沒有接種工程菌的活性炭，使其成為自河北建筑工程學院學報 2015年1期2015-04-29
- ChIFN－γ釀酒酵母工程菌粉的毒性與營養(yǎng)分析
N－γ釀酒酵母工程菌進行干粉制備并對其安全性及營養(yǎng)價值進行評價分析，為進一步開發(fā)利用ChIFN－γ微生態(tài)飼料添加劑提供依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料野生型釀酒酵母菌株INVSC1購自Invitrogen公司，攜帶ChIFN－γ基因的INVSC1/pYE－IFNG重組酵母工程菌株由本實驗室創(chuàng)制。1.2 方法1.2.1 酵母工程菌粉制備 INVSC1/pYE－IFNG釀酒酵母工程菌的培養(yǎng)和目標蛋白誘導表達操作參見相關文獻［10］。誘導表達后的工程菌液按150山地農業(yè)生物學報 2015年3期2015-04-24
- 慶大霉素生物合成基因genB4的研究
nB4基因缺失工程菌GB4408.對菌株GB4408的發(fā)酵產物進行了TLC、HPLC和MS分析，結果表明GB4408不再合成慶大霉素C族組分，而是積累中間代謝產物G418、西索霉素和威大霉素，阻斷了從西索霉素到慶大霉素C1a的轉化以及從威大霉素到慶大霉素C2的轉化，這可能是genB4基因參與了慶大霉素絳紅糖胺C4′和C5′的雙脫氫作用.據(jù)此推論，在菌株GbK(△genK)基礎上敲除了genB4基因，并成功獲得一株主產西索霉素的工程菌GbKB4，進一步驗證了延邊大學學報（自然科學版） 2015年4期2015-02-25
- 幽門螺桿菌多靶點疫苗工程菌BIB發(fā)酵及純化工藝研究＊
桿菌多靶點疫苗工程菌（BIB），并通過大量的體內外實驗證實了BIB工程菌表達的重組蛋白（rBIB）具有良好的免疫原性與免疫保護性［5－8］。本研究以搖瓶發(fā)酵結果為基礎，對影響B(tài)IB收率的因素如發(fā)酵培養(yǎng)基、工作種子液接種量、誘導劑濃度、誘導起始時間、誘導持續(xù)時間及誘導劑添加方式等進行優(yōu)化，再放大工藝至50L發(fā)酵罐中進行綜合條件驗證，初步建立起B(yǎng)IB工程菌的高密度發(fā)酵工藝；再利用rBIB蛋白的高等電點特性（pI＝9.05），在pH為7.0～7.5的磷酸鹽緩沖液成都醫(yī)學院學報 2014年5期2014-12-05
- 產蝦青素釀酒酵母工程菌的構建
蝦青素釀酒酵母工程菌的構建謝貴各，朱麗，蔣宇，戈梅，倪孟祥210009 南京，中國藥科大學生命科學與技術學院（謝貴各、倪孟祥）；200240 上海來益生物藥物研發(fā)中心（朱麗、戈梅）；200240 上海工業(yè)微生物所（蔣宇）對釀酒酵母固有的 β-胡蘿卜素代謝途徑進行擴展，構建能夠合成蝦青素的釀酒酵母工程菌。對不同來源的蝦青素合成基因（β-胡蘿卜素羥化酶）與（β-胡蘿卜素酮化酶）進行隨機組合，采用 overlap PCR 技術構建串聯(lián)表達質粒，并將其導入產 β-中國醫(yī)藥生物技術 2014年6期2014-11-01
- 重組環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶溫控型工程菌的構建及其培養(yǎng)條件的優(yōu)化
基轉移酶溫控型工程菌的構建及其培養(yǎng)條件的優(yōu)化凡 寧，張洪斌*，凌 凱，凌國慶，胡雪芹（合肥工業(yè)大學醫(yī)學工程學院，安徽 合肥 230009）采用聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）法從蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus）中擴增了β-環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶（β-cyclodextrin glucanotransferase，β-CGTase）基因，將該基因克隆到pBV220質粒中，轉化E.coli DH5α，經氨食品科學 2014年11期2014-01-18
- 重組肝靶向干擾素工程菌菌株的遺傳穩(wěn)定性研究
0006)基因工程菌株的遺傳穩(wěn)定性主要是指工程菌株的質粒穩(wěn)定性，即宿主細胞在繁殖分裂過程中質粒丟失的程度[1]。工程菌的遺傳穩(wěn)定性對于大規(guī)模發(fā)酵和產物制備至關重要，是高水平發(fā)酵的基本條件，研究其穩(wěn)定性對進一步的藥物開發(fā)具有指導作用[2]。干擾素(Interferon，IFN)是慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)抗病毒治療的首選藥物之一[3-7]。其中IFNα2b是FDA批準的第一個抗HBV藥，但是臨床治療時IFNα2b在體內容易生物學雜志 2013年3期2013-12-21
- 重組人胰島素樣生長因子－1工程菌發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化
［6］。要實現(xiàn)工程菌的高密度生長及重組hIGF－1的高效表達，首先需要合適的、能夠滿足表達需要的發(fā)酵培養(yǎng)基。實驗室中常用的培養(yǎng)基如LB、M9、MBL等成分相對單一，要用于高密度培養(yǎng)還需要對其組成尤其是碳源、氮源及其比例進行進一步的優(yōu)化［7］。作者在此以M9培養(yǎng)基為初始發(fā)酵培養(yǎng)基，在單因素實驗基礎上，利用正交實驗［8，9］優(yōu)化適合于表達重組hIGF－1大腸桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，以期為后續(xù)的大量生產奠定基礎。1 實驗1．1 菌種與培養(yǎng)基表 達 hIGF－1 的化學與生物工程 2013年4期2013-08-14
- 利用菌體生長限制效應的HBV DNA疫苗發(fā)酵工藝※
V DNA疫苗工程菌的發(fā)酵工藝進行優(yōu)化。方法首先通過搖瓶培養(yǎng)確定基礎培養(yǎng)基組成，提高單位菌量的質粒表達量。其次，在40 l發(fā)酵階段，通過溶氧反饋調節(jié)的補料方式產生生長限制效應，進一步獲得高拷貝表達質粒的菌體。結果培養(yǎng)基優(yōu)化后的工程菌DH5α/pS2S發(fā)酵最終可獲得質粒304.99mg/l，質粒含量可達到2.40mg/g濕菌，超螺旋質粒DNA的比例達95%以上。結論已建立了在單位體積和單位菌量內高表達質粒HBV DNA疫苗工程菌的發(fā)酵工藝，為HBV DNA疫中國藥物經濟學 2013年8期2013-07-08
- 殺蟲防菌Bt工程菌的構建
細菌病害的Bt工程菌。從而利用Bt毒蛋白的殺蟲作用和AHL水解酶水解AHL的特性，達到既能殺蟲又能使植物病原細菌失去致病力的雙重效果。這為生物防治農作物病蟲害開辟了一條新途徑。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 菌種E.coliDH5α本實驗室保存，宿主殺蟲菌Bt由生物所微生物研究室提供，采用從原始菌接入LB平板培養(yǎng)基中長出的菌作為測試菌。1.1.2 質粒pUC18－ss10，抗Ap，由本實驗室構建并保存；pHT304，抗Ap＋Em，由武漢病毒研究所提供河北省科學院學報 2013年3期2013-05-08
- 乳酸和琥珀酸研究相關項目通過鑒定
發(fā)酵的大腸桿菌工程菌HBUT－D。建立了工程菌菌株高產D－乳酸的發(fā)酵及分離純化工藝，D－乳酸產量達到88.15 g·L－1，光學純度為99%。該項技術有助于環(huán)保型生物降解型材料的推廣使用，符合綠色低碳經濟的發(fā)展方向?！案弋a琥珀酸重組大腸桿菌的構建及工業(yè)化關鍵技術的研究”利用同源重組和位點特異性重組技術，無痕敲除了野生型大腸桿菌琥珀酸代謝競爭旁路的ldhA、adhE、pflB、poxB、ackA、mgsA、aspC和sfcA基因，獲得了高產琥珀酸大腸桿菌工程化學與生物工程 2013年3期2013-04-11
- 印染廢水脫色生物強化工程菌的構建及應用進展
8]。生物強化工程菌在印染廢水脫色處理中的研究應用也越來越廣泛，向印染廢水處理系統(tǒng)中投加具有特殊降解作用的微生物，能大大提高廢水的脫色處理效果。1 生物強化工程菌及其構建工程菌（engineering bacterium）可以分為狹義工程菌和廣義工程菌。狹義工程菌是指將已確定的多種降解性的目的基因分離出來，通過基因操作獲得的集多種微生物降解功能于一身，同時可以降解多種有機物的新型微生物。而廣義工程菌是指將從自然環(huán)境、污染環(huán)境或處理系統(tǒng)中分離、篩選和鑒定的高化工進展 2013年4期2013-04-10
- 基于反義RNA技術的FabI抑制劑篩選模型的構建
i中，得到反義工程菌E.coli/pHNF；通過平板表型觀察對反義工程菌進行篩選；考察了 IPTG濃度對篩選模型的影響，確定 96 孔板抗菌篩選模型的條件，并用三氯生作為陽性對照、氨芐西林和淺藍菌素作為陰性對照對該模型進行評價。結果獲得了針對fabI的反義工程菌，確定了最適 IPTG濃度為 40 μmol/L，成功構建了 FabI 特異性酶抑制劑的超敏全細胞篩選模型，并驗證了其可行性。應用該篩選模型對5847 個內生真菌次級代謝產物進行活性篩選，初篩陽性率中國醫(yī)藥生物技術 2012年3期2012-02-03
- 內切中性纖維素酶EGⅡ的發(fā)酵條件優(yōu)化
的畢赤酵母基因工程菌EIM-50-eg2的發(fā)酵條件進行優(yōu)化，為該酶的生產應用提供基礎參數(shù)。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 菌株畢赤酵母基因工程菌EIM-50-eg2，工業(yè)微生物教育部工程研究中心克隆表達內切中性纖維素酶的高產菌株。1.1.2 主要試劑和溶液底物溶液、DNS溶液、醋酸-醋酸鈉緩沖液、葡萄糖標準溶液。1.1.3 培養(yǎng)基的制備和菌株培養(yǎng)方法①YPD液體培養(yǎng)基:酵母提取物10 g/L，胰蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，pH自然，115微生物學雜志 2012年1期2012-01-11
- 轉MT工程菌的構建及其對重金屬的抗性研究
006）轉MT工程菌的構建及其對重金屬的抗性研究儀慧蘭，呂品，吳麗華（山西大學 生命科學學院，山西 太原 030006）利用重疊延伸PCR技術克隆金屬硫蛋白（MT）和綠色熒光蛋白（GFP）基因片段，并將兩基因融合連接構建重組表達載體，采用氯化鋰法轉化畢赤酵母，獲得工程菌株.熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，工程菌在藍光激發(fā)下發(fā)出綠色熒光，說明GFP基因被正確表達.在培養(yǎng)基中加入一定濃度的銅（1.0 mmol／L，1.5 mmol／L）、鉻（150μmol／L，200μm山西大學學報（自然科學版） 2012年2期2012-01-11
- 溶氧濃度對rhG-CSF工程菌高密度發(fā)酵的影響
rhG-CSF工程菌高密度發(fā)酵的影響岑 仡1，童 涌1，楊 峰2(1.上海三維生物技術有限公司，上海 201206； 2. 第二軍醫(yī)大學無機化學教研室，上海 200433)目的確定rhG-CSF工程菌高密度發(fā)酵的最佳溶氧濃度。方法通過通入純氧，高密度發(fā)酵的溶氧值可以精確控制?？疾觳煌苎鯘舛葘?span id="j5i0abt0b" class="hl">工程菌的生長、質粒丟失率、乙酸積累情況以及rhG-CSF表達的影響，來確定溶氧的最佳控制范圍。結果工程菌生長階段溶氧控制在25%，誘導后控制在35%，最有利于菌體生長藥學實踐雜志 2011年3期2011-11-22
- 紫穗槐-4,11-二烯合酶基因在酵母工程菌中具有協(xié)同作用
合酶基因在酵母工程菌中具有協(xié)同作用孔建強，支曉慧，王偉，程克棣，朱平中國醫(yī)學科學院&北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所 衛(wèi)生部天然藥物生物合成重點實驗室&中草藥物質基礎與資源利用教育部重點實驗室，北京 100050為了構建高產的紫穗槐-4,11-二烯酵母工程菌，主要探究了含紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的不同表達載體在酵母工程菌中是否存在協(xié)同效應。首先構建了含紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的酵母表達載體 pGADADS，分別將 pGADADS和pYeDP60/G/A生物工程學報 2011年2期2011-09-29
- 大腸桿菌L-組氨酸生物合成途徑的改造及其對工程菌L-組氨酸產量的影響
徑的改造及其對工程菌L-組氨酸產量的影響魏 偉，劉 倩，盧利寧，謝希賢(工業(yè)發(fā)酵微生物教育部重點實驗室，天津科技大學生物工程學院，天津 300457)改造大腸桿菌L–組氨酸生物合成途徑，以提高L–組氨酸的產量.用NTG誘變大腸桿菌M-17(SGr)，依次賦予其 2–噻唑丙氨酸(2-TA)和組氨酸氧肟酸鹽(HisHx)遺傳標記，再以突變株 M-18(SGr＋2-TAr＋HisHxr)基因組為模板，擴增組氨酸操縱子基因，構建出重組質粒pUC118-his-op天津科技大學學報 2011年4期2011-01-10
- 工程菌β-胡蘿卜素累積及提取條件優(yōu)化的研究
β-胡蘿卜素的工程菌。本試驗總結了國內外學者的試驗方法和經驗，使β-胡蘿卜素于原核生物（E coli DH5α）中進行表達，優(yōu)化β-胡蘿卜素累積及提取方法，使其表達量和提取量達到最佳，旨在解決人們對它與日俱增的需求問題。1 材料和方法1.1 菌種菌株（E coli DH5α，含 pACCAR16△crtX），由山西農業(yè)大學生命科學學院實驗室保存。1.2 方法挑取大腸桿菌工程菌單菌落，接種于5 mL LB液體培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)過夜。取2 mL菌液加入1山西農業(yè)科學 2010年4期2010-09-10
- 纖維素酶基因克隆與表達研究進展